烟草黑胫病拮抗菌的筛
发布时间：2021-09-22 06:29
利用稀释涂布平板法,从黑胫病烟株的根部土壤中筛选获得了3株防治黑胫病的高效拮抗菌XCS007、YBM-4和YJC-4。通过对峙培养法和牛津杯法验证了3株拮抗菌及其粗提物对烟草黑胫病的抑菌效果。探究了3株拮抗菌的最适生长条件（温度、初始pH和培养时间）,利用形态学、生理生化特性和16S rDNA序列相似性分析,对3株拮抗菌的系统分类地位进行了鉴定。同时,测定了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性,在盆栽和大田试验中,调查了XCS007及其粗提物、YBM-4、YJC-4和XCS007+YBM-4+YJC-4混剂（比例1:1:1）的防病和控病效果。具体如下:1.从烟草黑胫病病株根部土壤中筛选获到324株细菌,利用对峙培养法,得到XCS007、YBM-4和YJC-4拮抗菌对烟草黑胫病的相对抑菌率分别达到91.80%、85.34%和72.99%,除有明显的抑菌圈外,黑胫病菌丝边缘处均有明显的溶解现象,抑制菌丝的正常生长和扩展,表明3种拮抗菌具有显著的抑菌效果。通过牛津杯法,XCS007拮抗菌粗提物的抑菌效果最为明显,YBM-4和YJC-4拮抗菌粗提物有一定的抑菌作用。2.研究发现,XCS007拮...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拮抗菌YBM-4、YJC-4和XCS007对烟草黑胫病菌的抑制作用Fig.2.1InhibitingeffectofstainYBM-4andYJC-4onP.nicotianae
2.2 YBM-4、YJC-4 和 XCS007 拮抗菌粗提物对黑胫病菌的抑制效果ibiting effect of crude extract YBM-4,YJC-4 and XCS007 strain on P. nic；B：YBM-4 菌落直径 d6=43.24mm；C：YJC-4 菌落直径 d7=71.71mm；D：XCS0ntrol group d5=90.00mm;B: Colony diameter of YBM-4 bacterium d6=12.76mm;C: Colonbacterium d7=23.50mm;D: Colony diameter of XCS007 bacterium d8=7.13mm种重要的真菌性土传病害，可以危害任何生长阶段的烟株和；刘晓侠等，2004）。被侵染的烟苗常表现出黑胫、穿大褂eller，1998）。烟草黑胫病的防治通常采取选育抗病品种、化措施，近些年，由于化学农药的滥用和烟草抗病品种种植年药性和品种抗病性逐渐丧失等后果，严重威胁着烟草的生产不易产生抗药性以及对人畜安全等优势为烟草绿色防控发展与应用作为其重要内容成为发展的必然趋势。本研究采用稀法从黑胫病病株的根部土壤中分离和筛选出 12 株对黑胫病007、YBM-4 和 YJC-4 等 3 株拮抗菌的拮抗作用最明显，防
观察菌液的变色情况和杜氏玻璃管中的产气状况。.3 拮抗菌的 16S rDNA 的序列测定根据 DNA 提取试剂盒的步骤，取过夜培养的拮抗菌 1 mL，经过细胞裂解、除杂和洗脱后。以 799F(5'-AACAGGATTAGATACCCTG-3')和 R1492(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')为引增菌株 16S rDNA。50μL 扩增体系：Template 1 μL，Reverse primer 1 μL，Forward primer 1 μL，2×Easy Tap PCRer Mix 25 μL，ddH2O 22 μL。PCR 反应体系：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 sec，55 ℃ 30 sec，72 ℃ 1 min，35 cycles，72 ℃min。PCR 产物委托青岛擎科生物技术有限公司进行序列测定，PCR 产物序列测定后，利用 BLAST进行相似性比较，用 MEGA5.1 的 Neighbor-Joining 法构建系统发育树。 试验结果.1 烟草黑胫病拮抗菌的形态学鉴定.1.1 拮抗菌的革兰氏染色鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄瓜枯萎病拮抗菌GK-6抗菌物质的产生条件[J]. 张雪辉,唐蕊,魏洪亮. 中国瓜菜. 2016(12)
[2]Act0988拮抗菌株鉴定及培养条件与菌株生长关系研究[J]. 张镜,牟利辉,刘志伟,况伟,黄思梅,刁树平,江娜,管曦光. 生物技术通报. 2016(07)
[3]黄绿绿僵菌悬乳剂与低剂量阿维菌素对Q型烟粉虱的联合防治作用[J]. 李茂业,陈德鑫,林华峰,李世广,潘敬,吴圣勇. 中国农业科学. 2016(13)
[4]烟草黑胫病生防菌的筛选、定殖及应用评价[J]. 曾衡,徐迪红,冀志霞,陈守文,魏雪团. 应用与环境生物学报. 2015(04)
[5]烟草黑胫病拮抗细菌复合菌株的筛选与防治效果评价[J]. 喻会平,罗定棋,代园凤,徐传涛,陈雪. 中国农学通报. 2015(08)
[6]烟草拮抗内生细菌的筛选与防病促生长效果[J]. 杨珍福,吴毅歆,陈映岚,何月秋. 中国烟草科学. 2014(06)
[7]一株Bacillus methylotrophilus的鉴定及对烟草疫霉防效研究[J]. 李祖红,曾嵘,陈龙,李梦娇,陈如海,代吉林,赵明富,文国松. 云南农业大学学报. 2014(06)
[8]渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用[J]. 赵洋,陈德鑫,黄化刚,武侠. 植物保护学报. 2014(05)
[9]烟草疫霉拮抗菌枯草芽孢杆菌21b菌株的分离鉴定及其生物学特性研究[J]. 王进,黄艳飞,汪汉成,王茂胜,陆宁,余知和. 微生物学通报. 2014(12)
[10]植物源药剂及化学药剂联合保健技术对烤烟黑胫病的防治效果[J]. 王若焱,夏志林,向小华,张海芳,冉茂,罗倩茜,吴泽刚,游安弟,苏五雷,廖姝娜. 中国农学通报. 2014(13)
博士论文
[1]荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens P-72-10菌株对烟草黑胫病的生防机理研究[D]. 董国菊.西南大学 2012
硕士论文
[1]两株生防菌对烟草黑胫病的抑制活性及其特性研究[D]. 王晶晶.河南农业大学 2011
[2]烟草根际促生细菌的分离、筛选及防治黑胫病研究[D]. 顾金刚.中国农业科学院 2000
本文编号：3403305
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
拮抗菌YBM-4、YJC-4和XCS007对烟草黑胫病菌的抑制作用Fig.2.1InhibitingeffectofstainYBM-4andYJC-4onP.nicotianae
2.2 YBM-4、YJC-4 和 XCS007 拮抗菌粗提物对黑胫病菌的抑制效果ibiting effect of crude extract YBM-4,YJC-4 and XCS007 strain on P. nic；B：YBM-4 菌落直径 d6=43.24mm；C：YJC-4 菌落直径 d7=71.71mm；D：XCS0ntrol group d5=90.00mm;B: Colony diameter of YBM-4 bacterium d6=12.76mm;C: Colonbacterium d7=23.50mm;D: Colony diameter of XCS007 bacterium d8=7.13mm种重要的真菌性土传病害，可以危害任何生长阶段的烟株和；刘晓侠等，2004）。被侵染的烟苗常表现出黑胫、穿大褂eller，1998）。烟草黑胫病的防治通常采取选育抗病品种、化措施，近些年，由于化学农药的滥用和烟草抗病品种种植年药性和品种抗病性逐渐丧失等后果，严重威胁着烟草的生产不易产生抗药性以及对人畜安全等优势为烟草绿色防控发展与应用作为其重要内容成为发展的必然趋势。本研究采用稀法从黑胫病病株的根部土壤中分离和筛选出 12 株对黑胫病007、YBM-4 和 YJC-4 等 3 株拮抗菌的拮抗作用最明显，防
观察菌液的变色情况和杜氏玻璃管中的产气状况。.3 拮抗菌的 16S rDNA 的序列测定根据 DNA 提取试剂盒的步骤，取过夜培养的拮抗菌 1 mL，经过细胞裂解、除杂和洗脱后。以 799F(5'-AACAGGATTAGATACCCTG-3')和 R1492(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')为引增菌株 16S rDNA。50μL 扩增体系：Template 1 μL，Reverse primer 1 μL，Forward primer 1 μL，2×Easy Tap PCRer Mix 25 μL，ddH2O 22 μL。PCR 反应体系：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 sec，55 ℃ 30 sec，72 ℃ 1 min，35 cycles，72 ℃min。PCR 产物委托青岛擎科生物技术有限公司进行序列测定，PCR 产物序列测定后，利用 BLAST进行相似性比较，用 MEGA5.1 的 Neighbor-Joining 法构建系统发育树。 试验结果.1 烟草黑胫病拮抗菌的形态学鉴定.1.1 拮抗菌的革兰氏染色鉴定
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄瓜枯萎病拮抗菌GK-6抗菌物质的产生条件[J]. 张雪辉,唐蕊,魏洪亮. 中国瓜菜. 2016(12)
[2]Act0988拮抗菌株鉴定及培养条件与菌株生长关系研究[J]. 张镜,牟利辉,刘志伟,况伟,黄思梅,刁树平,江娜,管曦光. 生物技术通报. 2016(07)
[3]黄绿绿僵菌悬乳剂与低剂量阿维菌素对Q型烟粉虱的联合防治作用[J]. 李茂业,陈德鑫,林华峰,李世广,潘敬,吴圣勇. 中国农业科学. 2016(13)
[4]烟草黑胫病生防菌的筛选、定殖及应用评价[J]. 曾衡,徐迪红,冀志霞,陈守文,魏雪团. 应用与环境生物学报. 2015(04)
[5]烟草黑胫病拮抗细菌复合菌株的筛选与防治效果评价[J]. 喻会平,罗定棋,代园凤,徐传涛,陈雪. 中国农学通报. 2015(08)
[6]烟草拮抗内生细菌的筛选与防病促生长效果[J]. 杨珍福,吴毅歆,陈映岚,何月秋. 中国烟草科学. 2014(06)
[7]一株Bacillus methylotrophilus的鉴定及对烟草疫霉防效研究[J]. 李祖红,曾嵘,陈龙,李梦娇,陈如海,代吉林,赵明富,文国松. 云南农业大学学报. 2014(06)
[8]渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum产几丁质酶的活性及对南方根结线虫卵孵化的抑制作用[J]. 赵洋,陈德鑫,黄化刚,武侠. 植物保护学报. 2014(05)
[9]烟草疫霉拮抗菌枯草芽孢杆菌21b菌株的分离鉴定及其生物学特性研究[J]. 王进,黄艳飞,汪汉成,王茂胜,陆宁,余知和. 微生物学通报. 2014(12)
[10]植物源药剂及化学药剂联合保健技术对烤烟黑胫病的防治效果[J]. 王若焱,夏志林,向小华,张海芳,冉茂,罗倩茜,吴泽刚,游安弟,苏五雷,廖姝娜. 中国农学通报. 2014(13)
博士论文
[1]荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens P-72-10菌株对烟草黑胫病的生防机理研究[D]. 董国菊.西南大学 2012
硕士论文
[1]两株生防菌对烟草黑胫病的抑制活性及其特性研究[D]. 王晶晶.河南农业大学 2011
[2]烟草根际促生细菌的分离、筛选及防治黑胫病研究[D]. 顾金刚.中国农业科学院 2000
本文编号：3403305
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