基于噬菌体展示技术的有机磷农药多残留免疫分析研究

发布时间：2021-10-09 15:51

　　有机磷农药（organophosphorus pesticides,OPs）是一类能够抑制胆碱酯酶活性,具有广谱杀虫性和较低稳定性的农药,在我国农业生产中使用很广泛。但是,大量使用有机磷农药造成的食品和环境中有机磷农药的残留,对人们的身体健康构成了严重的威胁。免疫分析法是一种快速、灵敏、简便并且成本较低的检测方法,适用于农药残留样品的日常高通量检测的需要。由于有机磷农药种类较多,且多采用混配的方式使用,因此,制备有机磷农药的宽谱特异性抗体并建立有机磷农药多残留免疫分析方法是十分必要的。在本研究中,我们首先设计并合成了一系列有机磷农药的通用结构半抗原,然后将半抗原偶联载体蛋白合成了人工免疫原和包被原。一方面,利用合成的免疫原免疫BALB/C小鼠,并制备了两种有机磷农药宽谱特异性单克隆抗体,然后利用单克隆抗体和相应的最佳包被原建立了有机磷农药多残留免疫分析方法。另一方面,通过构建噬菌体单链抗体文库,利用噬菌体展示技术筛选获得了一种有机磷农药宽谱特异性单链抗体,并建立了一种基于单链抗体有机磷农药多残留的免疫分析方法。此外,本研究还以制备的单克隆抗体为靶标,利用噬菌体展示技术筛选获得了其抗原模... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：132 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

噬菌体展示基本原理和筛选过程

新型净化处理技术发展迅速，目前，食品中农药残留分析的主要样品固相萃取、分散固相萃取、固相微萃取、液-液微萃取、超声辅助萃等（陈子键等，2015）。相萃取法萃取（solid-phase extraction, SPE）是由液固萃取和柱液相色谱技术相要用于样品的分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比可以提高更有效的将分析物与干扰组分分离，减少样品预处理步骤。SPE 操作，是农药残留检测中常用的样品前处理方法。针对填料保留机理的不留目标化合物 SPE 和保留杂质 SPE。其中保留目标化合物的 SPE 在应用更为广泛，其具体操作是将样品加入到已活化的固相吸附剂中，质而分析物仍留在吸附剂中，在清洗步骤后，用其它有机溶剂洗脱分提取物（Chen et al., 2010），操作步骤见图 1-2。

本研究根据有机磷农药的共有结构，共设计了 22 种有机磷农药通用结构半抗原，各半抗原名称及结构见图 2-1。Hapten 1~Hapten 20 的连接臂含有苯环结构，其中 Hapten1 和 Hapten 2 的羧基位于苯环的间位，Hapten 3 和 Hapten 4 的羧基位于苯环的对位，Hapten 5 和 Hapten 6 的羧基位于苯环的邻位，Hapten 7 和 Hapten 8 的羧基位于苯环的间位且在苯环的邻位有一甲氧基取代基，Hapten 9 和 Hapten 10 的羧基位于苯环的间位且在苯环的邻位有一甲基取代基，Hapten 11 和 Hapten 12 的羧基位于苯环的间位且在苯环的对位有一甲基取代基，Hapten 13 和 Hapten 14 的羧基位于苯环的对位且在苯环的邻位有一甲氧基取代基，Hapten 15 和 Hapten 16 的羧基位于苯环的对位且在苯环的邻位有一甲基取代基，Hapten 17 和 Hapten 18 的羧基位于苯环的对位且在苯环的间位有一甲基取代基，Hapten 19 和 Hapten 20 的羧基位于苯环的邻位且在苯环的间位有一甲基取代基；Hapten 21 连接臂为 4-氨基丁酸；Hapten 22 的连接臂为 6-氨基己酸。半抗原的合成路线见图 2-2。

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]基于量子点的荧光免疫分析在几种农兽药残留检测中的应用研究[D]. 陈翊平.华中农业大学 2010
[2]食品中有机磷农药残留的前处理研究及色谱检测[D]. 陈金泉.福州大学 2006



本文编号：3426667