粉红螺旋聚孢霉67-1产厚垣孢子相关基因的筛选与功能研究
发布时间：2021-10-13 02:43
粉红螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea）是一类重要的生防真菌,可以防治灰霉菌、核盘菌、立枯丝核菌等多种植物真菌病害,具有很强的生防潜力。目前真菌制剂多为分生孢子制剂,稳定性较差,货架期短。厚垣孢子是真菌在特定条件下产生的一种抗逆结构,对真菌生防制剂的研发具有重要意义,但迄今关于生防真菌厚垣孢子形成相关基因的研究极少。为筛选粉红螺旋聚孢霉产厚垣孢子相关基因,本研究以实验室前期分离的粉红螺旋聚孢霉高效菌株67-1为材料,通过高通量测序获得粉红螺旋聚孢霉67-1菌株产厚垣孢子转录组,筛选出不同产孢条件下稳定表达的适宜内参基因,并通过基因敲除,证明己糖激酶基因、聚酮化合物羟化酶基因和醛脱氢酶基因在粉红螺旋聚孢霉67-1菌株厚垣孢子形成过程中的作用,为揭示厚垣孢子形成机制奠定了基础。为获得粉红螺旋聚孢霉67-1菌株产厚垣孢子相关基因,本实验以粉红螺旋聚孢霉67-1菌株为材料,分别在36 h和72 h取样,通过高通量测序技术和实时荧光定量PCR获得粉红螺旋聚孢霉67-1菌株产孢差异表达基因。转录组分析获得549,661,174 clean reads。36 h时有67个基因上调表达,...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组测序实验步骤Fig.2.1Stepsoftranscriptomesequenceanalysis
农业科学院硕士学位论文 第二章 粉红螺旋聚孢霉 67-1 产厚垣孢子转录组测序与分析 实验结果.1 分生孢子和厚垣孢子显微观察以实验室前期设计的产孢培养基配方为基础，通过调节营养条件及 pH 和温度，对产厚垣孢养基进一步优化，获得粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株产厚垣孢子适宜培养基。用显微镜（Olympus61, Tokyo, Japan）观察分生孢子和厚垣孢子。在厚垣孢子培养过程中，分生孢子被抑制，分生培养过程中未观察到厚垣孢子。可以看到厚垣孢子来自菌丝的顶端或者中部，在培养后期大菌丝都能转化成厚垣孢子，和分生孢子相比，厚垣孢子较大、细胞壁较厚（图 2.2）。
图 2.3 粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 个样品提取 RNA 电泳验证对照（产分生孢子过程）36 h 三个重复，4-6 表示对照 72 h 三个重复，7-9 表示处理（产厚垣孢子过个重复，10-12 表示处理 72 h 三个重复Fig. 2.3 Electrophoresis verification of 12 RNA samples extracted from C. rosea 67-1 strain three repeats of the control ( process produce conidiospores) at 36 h, 4-6 show three repeats of the control ahow three repeats of the treatment (process produce chlamydospores) at 36 h, 10-12 show three repeats ot at 72 h表 2.2 粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 个样品 RNA 提取质量Table 2.2 Quality of 12 RNA extracted from C.rosea 67-1 strainConcentration(ng/ l)Amount( g)OD260/280OD260/230RIN 28S/18S-1 225 15.75 2.15 2.21 8.4 1.6-2 229 16.03 2.16 2.26 9.3 1.7-3 158 18.96 2.13 2.11 9.0 1.6-1 178 24.92 2.13 2.23 9.8 1.7-2 194 13.58 2.17 2.24 9.3 1.8
本文编号：3433802
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
转录组测序实验步骤Fig.2.1Stepsoftranscriptomesequenceanalysis
农业科学院硕士学位论文 第二章 粉红螺旋聚孢霉 67-1 产厚垣孢子转录组测序与分析 实验结果.1 分生孢子和厚垣孢子显微观察以实验室前期设计的产孢培养基配方为基础，通过调节营养条件及 pH 和温度，对产厚垣孢养基进一步优化，获得粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株产厚垣孢子适宜培养基。用显微镜（Olympus61, Tokyo, Japan）观察分生孢子和厚垣孢子。在厚垣孢子培养过程中，分生孢子被抑制，分生培养过程中未观察到厚垣孢子。可以看到厚垣孢子来自菌丝的顶端或者中部，在培养后期大菌丝都能转化成厚垣孢子，和分生孢子相比，厚垣孢子较大、细胞壁较厚（图 2.2）。
图 2.3 粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 个样品提取 RNA 电泳验证对照（产分生孢子过程）36 h 三个重复，4-6 表示对照 72 h 三个重复，7-9 表示处理（产厚垣孢子过个重复，10-12 表示处理 72 h 三个重复Fig. 2.3 Electrophoresis verification of 12 RNA samples extracted from C. rosea 67-1 strain three repeats of the control ( process produce conidiospores) at 36 h, 4-6 show three repeats of the control ahow three repeats of the treatment (process produce chlamydospores) at 36 h, 10-12 show three repeats ot at 72 h表 2.2 粉红螺旋聚孢霉 67-1 菌株 12 个样品 RNA 提取质量Table 2.2 Quality of 12 RNA extracted from C.rosea 67-1 strainConcentration(ng/ l)Amount( g)OD260/280OD260/230RIN 28S/18S-1 225 15.75 2.15 2.21 8.4 1.6-2 229 16.03 2.16 2.26 9.3 1.7-3 158 18.96 2.13 2.11 9.0 1.6-1 178 24.92 2.13 2.23 9.8 1.7-2 194 13.58 2.17 2.24 9.3 1.8
本文编号：3433802
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