马铃薯黑胫病种薯带菌检测技术的研究
发布时间：2021-10-22 11:01
从发生马铃薯黑胫病的病薯上分离纯化得到马铃薯黑胫病菌,根据柯赫氏法则确定病原菌后并提取该病菌的DN A,用特异性引物Eca1g和Eca2g对DNA进行PCR扩增、测序,最终鉴定为欧文氏菌属马铃薯黑胫亚种（Erwinia carotovora subsp.atroseptica）。将不同浓度黑胫病菌针刺接种于马铃薯脐部,观察发病情况,并用传统法和改良法分别提取发病组织中黑胫病菌DNA,用特异性引物Eca1g和Eca2g进行PCR扩增来检验该种薯是否带有黑胫病菌。具体研究结果如下:（1）以马铃薯黑胫病菌DNA为模板,利用其特异性引物Eca1g和Eca2g,进行PCR扩增,扩增出片段的大小约为750bp。（2）当接种浓度小于9× 105cfu/ml时,接种种薯情况与对照相同,没有发病,种薯带有黑胫病菌但不发病;当接种浓度是1.8×106cfu/ml时,种薯发病,说明接种浓度大于1.8×106cfu/ml时,马铃薯种薯会发病并且肉眼可见。（3）传统法提取种薯黑胫病菌DNA灵敏度只能达到106cfu/ml,改良法提取种薯黑胫病菌DNA灵敏度可达到105cfu/ml。两者选其优,F日常的生产实践中...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３平板划线结果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
２．?１．?３．?１分离菌株的致病性测定结果??在马铃薯脐部针刺接菌，以无菌水作对照，１、２、３为三次重复，如图??１；经过６天后发病，马铃薯脐部切开后腐烂发臭，如图２。??ｆ，？?ｆ??图１接菌试验??Ｆｉｇｕｒｅ?Ｉ?Ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ??图２致病性测定结果??Ｆｉｇｕｒｅ２?Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｒｃｓｔｉｌｉｓ??２．?１．３．２?病原菌菌落形态观察??将病原菌在ＬＢ平板培养基上于２７°Ｃ培养４８ｈ，如图３，观察到ＬＢ培??养基上的菌落呈圆形，边缘整齐，隆起乳白色至浅黄色，半透明或不透明，??质地粘稠。??國??图３平板划线结果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
Ｆｉｇｕｒｃ４?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ??２．?１．３．４鞭毛染色结果??如图５，菌体颜色呈现深褐色，鞭毛浅褐色，可观察看到周生几根鞭毛。??ｆ??图５鞭毛染色结果??ＦｉｇｕｒｅＳ?Ｔｈｅ?ｆｌａｇｅｌｌｕｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ??２．２?常规ＰＣＲ方法鉴定病原菌??在１９８０年中期，致力于人类遗传研究的Ｋａｒｙ?Ｍｕｌｌｉｓ等在美国Ｃｅｔｕｓ??公司建立了聚合酶催化的链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｅｔｉｏｎ，?ＰＣＲ）?ｍ］。??随着科学技术的发展和突破，ＰＣＲ技术已得到各个领域的广泛应用，例如??微生物检测等［７２］。由于该技术具有较强特性包括灵敏、准确以及特异性等，??还能进行短时间快速检测，因此伴着这些特性，应用领域也得到了进一步??的扩大［７３］。所以使用常规ＰＣＲ技术做病原菌的鉴定。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]马铃薯黑胫病综合防治技术[J]. 陈国栋. 农民致富之友. 2016(13)
[2]马铃薯晚疫病研究进展[J]. 柳玲玲,芶久兰,秦松. 耕作与栽培. 2016(02)
[3]马铃薯常见病害综合防治技巧[J]. 贾佳. 农民致富之友. 2016(05)
[4]马铃薯疮痂病的发生与防治[J]. 李拴曹,李存玲. 陕西农业科学. 2016(01)
[5]马铃薯青枯病病原的鉴定[J]. 郑雪坳,宋波涛,谭晓丹,陈惠兰. 中国马铃薯. 2014(02)
[6]甘肃省马铃薯枯萎病（Fusarium avenaceum）鉴定及其病原生物学特性[J]. 王玉琴,杨成德,陈秀蓉,薛莉,苏建红. 植物保护. 2014(01)
[7]马铃薯病毒病防治技术研究进展[J]. 苑智华. 安徽农业科学. 2013(25)
[8]用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较[J]. 冯广达,陈美标,羊宋贞,朱红惠. 华南农业大学学报. 2013(03)
[9]内蒙古马铃薯疮痂病发生与防治途径[J]. 张建平,尹玉和,闫任沛,哈斯,林团荣,程玉臣,胡冰. 中国马铃薯. 2013(01)
[10]马铃薯早疫病研究进展及其综合防治[J]. 郑慧慧,王泰云,赵娟,吴学宏. 中国植保导刊. 2013(01)
硕士论文
[1]马铃薯枯萎病发生特点及防治措施的初步研究[D]. 王晓丽.内蒙古农业大学 2012
[2]马铃薯黑胫病菌实时定量荧光PCR检测[D]. 杨松.东北农业大学 2009
[3]内蒙古哈密瓜细菌性果斑病病原鉴定及种子带菌检测技术的研究[D]. 王政.内蒙古农业大学 2005
[4]哈密瓜果斑病菌快速检测方法的建立[D]. 回文广.中国农业科学院 2004
本文编号：3450963
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：42 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３平板划线结果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
２．?１．?３．?１分离菌株的致病性测定结果??在马铃薯脐部针刺接菌，以无菌水作对照，１、２、３为三次重复，如图??１；经过６天后发病，马铃薯脐部切开后腐烂发臭，如图２。??ｆ，？?ｆ??图１接菌试验??Ｆｉｇｕｒｅ?Ｉ?Ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ??图２致病性测定结果??Ｆｉｇｕｒｅ２?Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｒｃｓｔｉｌｉｓ??２．?１．３．２?病原菌菌落形态观察??将病原菌在ＬＢ平板培养基上于２７°Ｃ培养４８ｈ，如图３，观察到ＬＢ培??养基上的菌落呈圆形，边缘整齐，隆起乳白色至浅黄色，半透明或不透明，??质地粘稠。??國??图３平板划线结果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]马铃薯黑胫病综合防治技术[J]. 陈国栋. 农民致富之友. 2016(13)
[2]马铃薯晚疫病研究进展[J]. 柳玲玲,芶久兰,秦松. 耕作与栽培. 2016(02)
[3]马铃薯常见病害综合防治技巧[J]. 贾佳. 农民致富之友. 2016(05)
[4]马铃薯疮痂病的发生与防治[J]. 李拴曹,李存玲. 陕西农业科学. 2016(01)
[5]马铃薯青枯病病原的鉴定[J]. 郑雪坳,宋波涛,谭晓丹,陈惠兰. 中国马铃薯. 2014(02)
[6]甘肃省马铃薯枯萎病（Fusarium avenaceum）鉴定及其病原生物学特性[J]. 王玉琴,杨成德,陈秀蓉,薛莉,苏建红. 植物保护. 2014(01)
[7]马铃薯病毒病防治技术研究进展[J]. 苑智华. 安徽农业科学. 2013(25)
[8]用于PCR扩增的细菌DNA提取方法比较[J]. 冯广达,陈美标,羊宋贞,朱红惠. 华南农业大学学报. 2013(03)
[9]内蒙古马铃薯疮痂病发生与防治途径[J]. 张建平,尹玉和,闫任沛,哈斯,林团荣,程玉臣,胡冰. 中国马铃薯. 2013(01)
[10]马铃薯早疫病研究进展及其综合防治[J]. 郑慧慧,王泰云,赵娟,吴学宏. 中国植保导刊. 2013(01)
硕士论文
[1]马铃薯枯萎病发生特点及防治措施的初步研究[D]. 王晓丽.内蒙古农业大学 2012
[2]马铃薯黑胫病菌实时定量荧光PCR检测[D]. 杨松.东北农业大学 2009
[3]内蒙古哈密瓜细菌性果斑病病原鉴定及种子带菌检测技术的研究[D]. 王政.内蒙古农业大学 2005
[4]哈密瓜果斑病菌快速检测方法的建立[D]. 回文广.中国农业科学院 2004
本文编号：3450963
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