松墨天牛超气门蛋白的克隆与功能研究
发布时间：2021-10-28 16:41
松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）属于鞘翅目（Coleoptera）,天牛科（Cerambycidae）是危害马尾松（Pinus massoniana）等松材的重大森林害虫,是松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）的主要传播媒介。近3年来,松墨天牛分子生物学领域的研究从个别基因的克隆发展到转录组研究,为高通量研究基因奠定了基础;从单纯的生物信息学分析发展到结合生理学、毒理学及化学生态学等综合研究,充分展现了分子生物学的研究优势。超气门蛋白（ultraspiracle,USP）处于昆虫发育、变态及繁殖等过程级联调控的开始位置,研究不同目昆虫USP的结构及功能特点,深入地了解其作用方式及开展应用研究,无论对益虫生长发育的调控亦或是对害虫的防治都有重要的理论和实用价值。本文研究松墨天牛超气门蛋白cDNA的序列特征、功能等,对于开发环境友好型新药剂和基因调控开关等方面具有重要指导作用。本研究采用RACE方法克隆得到松墨天牛USP基因全场序列,应用RNA干扰（RNA interference,RNAi）方法对其功能进行了研究,同时进行了生物...
【文章来源】：华南农业大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
松墨天牛4龄幼虫总RNA电泳图
25图 2 MaUSP 的核苷酸及推导的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and deduced amino acid sequences of MaUSP注：起始密码子 ATG 以下划波浪线表示，终止密码子 TAA 以* 表示，20 个丝氨酸磷酸化位点、14 个苏氨酸磷酸化位点、4 个酪氨酸磷酸化位点分别以圆形、矩形、三角形表示，2 个糖基化位点以五角星形表示，加尾信号 AATAAA 以双下划线表示。使用 DNAMAN 序列分析软件将测序所得的 3′ RACE 序列和 5′ RACE 序列与从松墨天牛 cDNA 文库中筛选得到的松墨天牛超气门蛋白基因片段序列拼接得到如图 2所示序列。该序列全长为 1583 bp，命名为 MaUSP（GenBank 登陆号：KU587580），其中包含 186 bp 的 5′ 端非编码区及 241 bp 的 3′ 端非编码区，ORF 为 1155 bp，编码 384 个氨基酸，包含 12 bp 的 Poly A 尾巴和从第 1547 位至 1552 位的一个特征性序列，即加尾信号 AATAAA。通过 MaUSP 的磷酸化修饰位点预测发现，Tn 分值＞0.5
的磷酸化位点有：丝氨酸( Ser )磷酸化位点 20 个，苏氨酸( Thr )磷酸化位点 14 个，酪氨酸( Tyr )磷酸化位点 4 个，共计 38 个磷酸化位点，这些位点相对均匀地分布在整个多肽链中。NetOGlye 预测表明，MaUSP 在 256 和 379 氨基酸位点存在 N-糖基化修饰。3.3 USP 基因序列相似性比对
【参考文献】：
期刊论文
[1]松墨天牛Homothorax基因的鉴定及表达分析[J]. 陈敬祥,刘琪司,林同. 华北农学报. 2017(01)
[2]松墨天牛葡萄糖-6-磷酸异构酶基因克隆及序列分析[J]. 蔡紫玲,陈敬祥,林同. 南方农业学报. 2016(05)
[3]松墨天牛化学感受组织荧光定量PCR内参基因的鉴定与筛选[J]. 冯波,郭前爽,毛必鹏,杜永均. 昆虫学报. 2016(04)
[4]孟氏隐唇瓢虫气味结合蛋白ComOBP1基因的克隆和时空表达[J]. 潘畅,张宇宏,谢佳沁,李浩森,庞虹. 环境昆虫学报. 2016(02)
[5]松墨天牛核糖体蛋白（RPS15A）cDNA的克隆及农药胁迫对其表达的影响[J]. 罗淋淋,蔡紫玲,林同. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(02)
[6]松墨天牛包囊蛋白基因的克隆及表达特性分析[J]. 毛珊珊,吴华俊,林同. 中南林业科技大学学报. 2016(01)
[7]DNA条形码试剂盒检测技术在墨天牛鉴定中的应用[J]. 陈梦义,徐梅,钱路,安榆林,郝德君. 南京林业大学学报(自然科学版). 2015(06)
[8]松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式[J]. 吴华俊,蔡紫玲,罗淋淋,林同. 华北农学报. 2015(03)
[9]家蚕的蜕皮激素受体和超气门蛋白在大肠杆菌中的共表达和纯化[J]. 唐诗蕊,王涛,王旻. 药物生物技术. 2015(03)
[10]松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及组织表达谱和原核表达研究[J]. 钱凯,冯波,巫诩亮,劳冲,沈幼莲,杜永均. 昆虫学报. 2015(05)
博士论文
[1]拟黑多刺蚁蜕皮激素受体（EcR）和超气门蛋白（USP）的cDNA测序、mRNA表达及其与雌激素相关受体（ERR）的功能相关性分析[D]. 刘晓明.陕西师范大学 2013
[2]热休克蛋白同源物Hsc70等5种基因在蜕皮激素信号途径中的功能及相互作用研究[D]. 郑薇薇.山东大学 2010
硕士论文
[1]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[2]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白在丝腺中的表达特征及其相关功能研究[D]. 杜杰.苏州大学 2015
[3]松褐天牛OBPs基因克隆与分析[D]. 高雄.华中农业大学 2014
[4]黄花蒿EβF合成酶基因及麦长管蚜蜕皮素受体基因USP和EcR的克隆和遗传转化[D]. 陈红梅.河北农业大学 2014
[5]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的启动子分析[D]. 黄明霞.苏州大学 2014
[6]超气门蛋白（USP）基因及蜕皮激素受体（EcR）基因对拟黑多刺蚁和黄脸油葫芦生长发育调节功能的研究[D]. 党亮.陕西师范大学 2014
[7]甜菜夜蛾幼虫期EcR和USP基因表达模式与功能研究[D]. 刘鹏琰.南京农业大学 2013
[8]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达调控研究[D]. 苏保锦.苏州大学 2012
本文编号：3463063
【文章来源】：华南农业大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
松墨天牛4龄幼虫总RNA电泳图
25图 2 MaUSP 的核苷酸及推导的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and deduced amino acid sequences of MaUSP注：起始密码子 ATG 以下划波浪线表示，终止密码子 TAA 以* 表示，20 个丝氨酸磷酸化位点、14 个苏氨酸磷酸化位点、4 个酪氨酸磷酸化位点分别以圆形、矩形、三角形表示，2 个糖基化位点以五角星形表示，加尾信号 AATAAA 以双下划线表示。使用 DNAMAN 序列分析软件将测序所得的 3′ RACE 序列和 5′ RACE 序列与从松墨天牛 cDNA 文库中筛选得到的松墨天牛超气门蛋白基因片段序列拼接得到如图 2所示序列。该序列全长为 1583 bp，命名为 MaUSP（GenBank 登陆号：KU587580），其中包含 186 bp 的 5′ 端非编码区及 241 bp 的 3′ 端非编码区，ORF 为 1155 bp，编码 384 个氨基酸，包含 12 bp 的 Poly A 尾巴和从第 1547 位至 1552 位的一个特征性序列，即加尾信号 AATAAA。通过 MaUSP 的磷酸化修饰位点预测发现，Tn 分值＞0.5
的磷酸化位点有：丝氨酸( Ser )磷酸化位点 20 个，苏氨酸( Thr )磷酸化位点 14 个，酪氨酸( Tyr )磷酸化位点 4 个，共计 38 个磷酸化位点，这些位点相对均匀地分布在整个多肽链中。NetOGlye 预测表明，MaUSP 在 256 和 379 氨基酸位点存在 N-糖基化修饰。3.3 USP 基因序列相似性比对
【参考文献】：
期刊论文
[1]松墨天牛Homothorax基因的鉴定及表达分析[J]. 陈敬祥,刘琪司,林同. 华北农学报. 2017(01)
[2]松墨天牛葡萄糖-6-磷酸异构酶基因克隆及序列分析[J]. 蔡紫玲,陈敬祥,林同. 南方农业学报. 2016(05)
[3]松墨天牛化学感受组织荧光定量PCR内参基因的鉴定与筛选[J]. 冯波,郭前爽,毛必鹏,杜永均. 昆虫学报. 2016(04)
[4]孟氏隐唇瓢虫气味结合蛋白ComOBP1基因的克隆和时空表达[J]. 潘畅,张宇宏,谢佳沁,李浩森,庞虹. 环境昆虫学报. 2016(02)
[5]松墨天牛核糖体蛋白（RPS15A）cDNA的克隆及农药胁迫对其表达的影响[J]. 罗淋淋,蔡紫玲,林同. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(02)
[6]松墨天牛包囊蛋白基因的克隆及表达特性分析[J]. 毛珊珊,吴华俊,林同. 中南林业科技大学学报. 2016(01)
[7]DNA条形码试剂盒检测技术在墨天牛鉴定中的应用[J]. 陈梦义,徐梅,钱路,安榆林,郝德君. 南京林业大学学报(自然科学版). 2015(06)
[8]松墨天牛肌球蛋白轻链2基因的鉴定及表达模式[J]. 吴华俊,蔡紫玲,罗淋淋,林同. 华北农学报. 2015(03)
[9]家蚕的蜕皮激素受体和超气门蛋白在大肠杆菌中的共表达和纯化[J]. 唐诗蕊,王涛,王旻. 药物生物技术. 2015(03)
[10]松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及组织表达谱和原核表达研究[J]. 钱凯,冯波,巫诩亮,劳冲,沈幼莲,杜永均. 昆虫学报. 2015(05)
博士论文
[1]拟黑多刺蚁蜕皮激素受体（EcR）和超气门蛋白（USP）的cDNA测序、mRNA表达及其与雌激素相关受体（ERR）的功能相关性分析[D]. 刘晓明.陕西师范大学 2013
[2]热休克蛋白同源物Hsc70等5种基因在蜕皮激素信号途径中的功能及相互作用研究[D]. 郑薇薇.山东大学 2010
硕士论文
[1]松褐天牛气味结合蛋白基因的克隆与功能分析[D]. 王娟.华中农业大学 2015
[2]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白在丝腺中的表达特征及其相关功能研究[D]. 杜杰.苏州大学 2015
[3]松褐天牛OBPs基因克隆与分析[D]. 高雄.华中农业大学 2014
[4]黄花蒿EβF合成酶基因及麦长管蚜蜕皮素受体基因USP和EcR的克隆和遗传转化[D]. 陈红梅.河北农业大学 2014
[5]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的启动子分析[D]. 黄明霞.苏州大学 2014
[6]超气门蛋白（USP）基因及蜕皮激素受体（EcR）基因对拟黑多刺蚁和黄脸油葫芦生长发育调节功能的研究[D]. 党亮.陕西师范大学 2014
[7]甜菜夜蛾幼虫期EcR和USP基因表达模式与功能研究[D]. 刘鹏琰.南京农业大学 2013
[8]家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达调控研究[D]. 苏保锦.苏州大学 2012
本文编号：3463063
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3463063.html
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