东亚飞蝗上颚高丰度表皮蛋白的功能分析

发布时间：2021-11-18 16:14

　　飞蝗是我国主要的农业害虫,蝗灾的爆发给国家和社会造成了巨大的损失。上颚是飞蝗进食及为害的主要工具,其表面覆盖着坚硬耐磨的表皮。因此,如果能够阐明飞蝗上颚坚硬表皮形成的机制,进而通过RNA干扰来沉默其中关键基因的表达,降低飞蝗上颚的机械性能,从而实现对飞蝗的控制。本课题组前期工作已经获得了东亚飞蝗上颚的转录组及蛋白组数据。本论文主要对其中高丰度表皮蛋白基因的生理功能进行了研究,明确了其对上颚硬度的关键性,为设计针对东亚飞蝗的RNA农药提供了新的思路和候选靶标基因。本论文的具体研究内容如下:（1）通过转录组、蛋白组分析,挑选出在东亚飞蝗上颚中高丰度的表皮蛋白基因。通过与东亚飞蝗基因组数据库中的序列进行比对,确定目的基因序列,并从自行构建的cDNA文库中成功调取了目的基因。这四个基因分别是:35501和30044（表皮蛋白CPR-RR2家族）;39539和30387（类表皮蛋白）。（2）利用实时定量PCR对四个表皮蛋白基因的转录水平进行分析。就时期特异性而言,35501基因和30044基因主要在蜕皮前高转录水平,但35501基因转录水平明显高于30044基因。39539基因在蜕皮前后均高转录... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1.文献综述
    1.1 东亚飞蝗
        1.1.1 东亚飞蝗的特征
        1.1.2 东亚飞蝗的分布和危害
    1.2 昆虫表皮
        1.2.1 昆虫表皮的结构与功能
        1.2.2 昆虫表皮的代谢
    1.3 表皮蛋白
        1.3.1 表皮蛋白分类
        1.3.2 CPR家族
        1.3.3 表皮蛋白基因研究现状
        1.3.4 飞蝗表皮蛋白研究现状
    1.4 RNAi技术
        1.4.1 RNAi特点
        1.4.2 dsRNA导入途径
        1.4.3 RNAi应用
    1.5 选题依据与研究内容
        1.5.1 选题依据
        1.5.2 研究内容
2.东亚飞蝗上颚高转录水平表皮蛋白序列分析
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 东亚飞蝗上颚转录组和蛋白组分析
        2.2.3 表皮蛋白筛选与序列分析
        2.2.4 东亚飞蝗上颚中RNA的提取
        2.2.5 cDNA合成
        2.2.6 目的基因的调取与测序
    2.3 实验结果
        2.3.1 转录组与蛋白组分析
        2.3.2 目的及基因调取与验证
    2.4 讨论与分析
    2.5 小结
3 东亚飞蝗上颚表皮蛋白的表达模式分析
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 不同时期总RNA提取及c DNA合成
        3.2.3 不同组织RNA提取及c DNA合成
        3.2.4 目的基因时期表达特异性检测
        3.2.5 目的基因组织表达特异性检测
    3.3 实验结果
        3.3.1 目的基因时期表达模式分析
        3.3.2 目的基因组织表达模式分析
    3.4 讨论与分析
    3.5 小结
4.东亚飞蝗上颚目的蛋白的生理功能分析
    4.1 引言
    4.2 实验材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 DNA模板制备
        4.2.3 dsRNA合成
        4.2.4 dsRNA体外注射
        4.2.5 宏观表型观察
        4.2.6 RNAi基因沉默效果检测
        4.2.7 上颚硬度检测
    4.3 实验结果
        4.3.1 模板及dsRNA合成
        4.3.2 宏观表型分析
        4.3.3 基因沉默效果
        4.3.4 上颚表型分析
        4.3.5 上颚硬度分析
    4.4 讨论与分析
    4.5 小结
结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]靶向调控飞蝗表皮代谢相关基因的miRNA的鉴定与分析[J]. 王艳丽,杨美玲,马恩波,张建珍.  昆虫学报. 2017(03)
[2]中国历史蝗区演化与水系变迁研究回顾与展望[J]. 李钢,孔冬艳,李丰庆,刘倩,王会娟.  热带地理. 2017(02)
[3]昆虫表皮蛋白基因研究进展[J]. 梁欣,陈斌,乔梁.  昆虫学报. 2014(09)
[4]蝗虫再猖獗的控制与生态学治理[J]. 陈永林.  中国科学院院刊. 2000(05)
[5]亚非地区蝗虫发生动态分析[J]. 陈永林.  世界农业. 1987(01)

硕士论文
[1]昆虫裂解性多糖单加氧酶的性质表征与功能分析[D]. 邓晓瑞.大连理工大学 2018



本文编号：3503206