水稻细菌性褐条病菌RS-2六型分泌系统致病机制的研究

发布时间：2021-11-18 19:12

　　水稻细菌性褐条病是影响水稻生产的一种非常重要的病害,危害严重,在国外水稻种植地区普遍发生,我国近年来各地陆续有该病发生的报道。水稻细菌性褐条病的病原菌为燕麦噬酸菌燕麦亚种Acidovorax avenae subsp.avenae（Aaa）。本实验室的前期研究已发现Aaa菌株RS-1中存在六型分泌系统（T6SS）,且在Aaa的致病过程中起着异常重要的作用;近期本实验室通过序列比对等生物信息学方法发现Aaa菌株RS-2中也含有25个T6SS基因,但其致病性比菌株RS-1弱,此时,迫切需要搞清楚T6SS在Aaa菌株RS-2致病中的功能。本研究在通过同源重组法构建了菌株RS-2的25个T6SS基因突变体及7个相关回补体的基础上,测定和分析它们的致病性、生长曲线、生物膜形成、游动性和效应蛋白分泌等毒力相关表型,结果发现pppA,clpB,hcp,dotU,icmF impF,impM和8个vgrG（1-8）基因突变会导致菌株RS-2的致病性和Hcp效应蛋白的分泌显著降低,其中致病性降低了 17.47～56.40%,Hcp蛋白分泌减少了 37.78～68.46%,由阳性降至阴性;在培养12、24... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２水稻细菌性褐条病菌菌株ＲＳ－１中Ｔ６ＳＳ的组成（Ｉｂｒａｈｉｍ等，２０１２）??－

浙江大学硕士学位论文??材料与方（Ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ－）具有抗性。?????Ｃｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔ－?－?Ｇｅｎ＞＊＂??（３０２８）?ＡｆｌＨＩ?Ｘｃｍｌ?（１４８）??

通过目的片段与质粒的双酶切，重组，转化入五．Ｃｏ／／ＤＨ５ａ感受态细胞中，在含卡那霉素??（终浓度为５０＾ｇ／ｍｌ）的ＬＢ平板上培养２４ｈ，形成单菌落以后，挑单菌落，用Ｔ６ＳＳ回补基因??目的片段引物进行ＰＣＲ扩增，结果如图４．５所示，条带单一，且大小与图４．４相同，均与软??件设计的大小相符，进一步说明Ｔ６ＳＳ回补基因的目的片段可能已导入转化子中，得到了?７个??疑似ｐＲＡＤＫ－Ｔ６ＳＳ重组质粒。??４０００??２０００??１０００??图４．５大肠杆菌转化子Ｔ６ＳＳ回补基因目的片段的引物验证??Ｆｉｇ．?４．５?Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆＥ．?ｃｏｌｉ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ?ｗｉｔｈ?Ｔ６ＳＳ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｉｍｅｒｓ??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?１?ｋｂ；?１￣７：?ｐｐｐＡ，?ｉｃｍＦ，?ｈｅｐ，?ｄｏｔＵ，?ｉｍｐＪ，?ｃｌｐＢ，?ｉｍｐＭ??４．３．３?Ｔ６ＳＳ基因回补体的筛选和鉴定??待电击转化子在含氯霉素（终浓度为５０?ｐｇ／ｍｌ）的ＬＢ平板上长出单菌落后，先将单菌落在??３６??

【参考文献】：
期刊论文
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[3]水稻细菌性褐条病病原的鉴定[J]. 徐丽慧,邱文,张唯一,李斌,谢关林.  中国水稻科学. 2008(03)
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[5]水稻细菌性褐条病识别与防治[J]. 伏震,袁兆恩.  农技服务. 2007(04)
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[10]水稻细菌性褐条病调查简报[J]. 雷国明.  湖北农业科学. 1975(11)

博士论文
[1]水稻细菌性褐条病菌致病机理及其氧胁迫相关基因簇调控蛋白TetR的功能分析[D]. 刘贺.浙江大学 2015

硕士论文
[1]两种水稻主要病原细菌噬菌体的分离、鉴定和特征化研究[D]. 王丽.浙江大学 2016
[2]水稻细菌性褐条病原的鉴定、全基因组和致病相关基因的研究[D]. 张国庆.浙江大学 2012



本文编号：3503457