中华蜜蜂信息素相关蛋白OBP11、CSP3及ASP1与化学配基和新烟碱类杀虫剂的互作机制研究
发布时间：2021-11-28 04:31
中华蜜蜂Apis cerana cerana是中国的独特蜂种,具有抗寒、抗螨、易分蜂、善于利用零星蜜源及适应性强的优良特性,在植物授粉方面发挥着非常重要的作用。其通过体表特定的嗅觉感受器中的嗅觉相关蛋白与外界环境中各种化学气味物质接触,其中气味结合蛋白（odorant-binding proteins,OBPs）发挥着重要作用。而亚致死剂量下的化学物质——新烟碱杀虫剂对蜜蜂等授粉昆虫具有不同的毒性,这种毒性差异引起的蜜蜂毒害及其分子机制未得到深入解析。本研究对现有的OBP11、CSP3和ASP1这3种信息素相关蛋白与相应的配基和吡虫啉进行了较为深入的研究。利用多光谱技术研究了OBP11、CSP3和ASP1对外界气味分子及吡虫啉的结合模式。确定了OBP11与多种配基、CSP3和吡虫啉结合的关键氨基酸和主要作用力。还对温度、pH以及吡虫啉对蛋白和配基的结合影响进行了研究。主要结果如下:1.中华蜜蜂信息素相关蛋白OBP11的蛋白纯化、定点突变及配基结合机理研究。制备了AcerOBP11蛋白,并利用LC-MS/MS质谱进行了验证。通过扫描电镜和透射电镜进行了触角亚细胞定位,表明工蜂触角的多样性...
【文章来源】：中国计量大学浙江省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
中蜂OBP11重组蛋白诱导表达及纯化
图 2. 2 中蜂 OBP11 质谱一级图谱(A)和 OBP11 搜库后信息(B)以及重合序列(C)Fig. 2.2 The first-levelmass spectrometry of AcerOBP11 (A) and total data of OBP11search (B) and the coincidence sequence (C)2.2.3 中华蜜蜂 OBP11 重组蛋白与信息素和植物挥发物的荧光猝灭光谱分析荧光发射光谱扫描确定蛋白 OBP11 的激发波长在 281 nm，用 1 mmol·L-1的 1-NPN 溶液对工作浓度为 1 μmol·L-1OBP11 重组蛋白溶液进行滴定，然后荧光扫描，如图 2.3 所示，回归方程线性化拟合的相关系数达到 0.993，显示拟合较好。根据公式（2-1），得到 OBP11 与 1-NPN 的解离常数 K1-NPN为 2.42μmol·L-1，结合位点数 n 为 0.85，表明 OBP11 与 1-NPN 具有良好的结合，因此1-NPN 能够用于 OBP11 与候选化学信息素功能研究时的竞争性荧光报告子。
4-Allylveratrole HOB Farnesol-13.991 -15.116 -20.489 -11.492 -14.322 -17.1043 -13.637 -8.848 -14.0831 -11.503 -8.880 -10.8472 -13.745 -9.057 -12.2484 -5.274 -3.506 -5.66485 -1.571 -3.270 -3.55221 -2.330 -2.380 -6.13763 -2.249 -2.041 -4.71023 -0.595 -0.314 -3.16497 -0.350 -1.409 -1.4108 氢键。量贡献一个更直观的表征，通过色阶及能量贡献热图，如图 2.7 所示，黑色方框为 Ile97、Ile140 和 Phe101。
【参考文献】：
期刊论文
[1]新烟碱类杀虫剂对蜜蜂行为与生理影响的研究进展[J]. 李梦,李志国,和静芳,苏松坤. 福建农林大学学报(自然科学版). 2016(05)
[2]家蚕化学感受蛋白CSP16的表达及结合特性分析[J]. 郭兴国,陈莹,邢秋婷,邢万静,阚云超,乔惠丽. 昆虫学报. 2016(06)
[3]中华蜜蜂报警信息素的生物活性检测[J]. 李新宇,董诗浩,谭垦. 中国蜂业. 2016(04)
[4]中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克隆、原核表达和配基结合特性分析[J]. 吴帆,黄君君,谭静,唐明珠,李红亮. 昆虫学报. 2016(01)
[5]Q型烟粉虱化学感受蛋白CSP1与植物挥发物的结合特征[J]. 吴帆,张晓曼,赵磊,崔旭红,李红亮,罗晨. 中国农业科学. 2015(10)
[6]吡虫啉对意大利蜜蜂脑乙酰胆碱受体分布的影响[J]. 周婷,宋怀磊,王强,代平礼,吴艳艳,孙继虎. 昆虫学报. 2013(11)
[7]中华蜜蜂性信息素结合蛋白ASP1的原核表达及配基结合特性分析[J]. 翁琛,张林雅,赵磊,付余霞,罗晨,李红亮. 昆虫学报. 2013(10)
[8]中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析[J]. 李红亮,张林雅,庄树林,倪翠侠,韩宝瑜,商晗武. 中国农业科学. 2013(01)
[9]中华蜜蜂Orco嗅觉受体基因的克隆、表达及亚细胞定位[J]. 张林雅,谢冰花,倪翠侠,赵磊,李红亮,商晗武. 昆虫学报. 2012(11)
[10]中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展[J]. 孟飞,胥保华,郭兴启. 应用昆虫学报. 2012(05)
硕士论文
[1]中华蜜蜂两种嗅觉相关蛋白的基因克隆与功能研究[D]. 张林雅.中国计量学院 2013
本文编号：3523710
【文章来源】：中国计量大学浙江省
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
中蜂OBP11重组蛋白诱导表达及纯化
图 2. 2 中蜂 OBP11 质谱一级图谱(A)和 OBP11 搜库后信息(B)以及重合序列(C)Fig. 2.2 The first-levelmass spectrometry of AcerOBP11 (A) and total data of OBP11search (B) and the coincidence sequence (C)2.2.3 中华蜜蜂 OBP11 重组蛋白与信息素和植物挥发物的荧光猝灭光谱分析荧光发射光谱扫描确定蛋白 OBP11 的激发波长在 281 nm，用 1 mmol·L-1的 1-NPN 溶液对工作浓度为 1 μmol·L-1OBP11 重组蛋白溶液进行滴定，然后荧光扫描，如图 2.3 所示，回归方程线性化拟合的相关系数达到 0.993，显示拟合较好。根据公式（2-1），得到 OBP11 与 1-NPN 的解离常数 K1-NPN为 2.42μmol·L-1，结合位点数 n 为 0.85，表明 OBP11 与 1-NPN 具有良好的结合，因此1-NPN 能够用于 OBP11 与候选化学信息素功能研究时的竞争性荧光报告子。
4-Allylveratrole HOB Farnesol-13.991 -15.116 -20.489 -11.492 -14.322 -17.1043 -13.637 -8.848 -14.0831 -11.503 -8.880 -10.8472 -13.745 -9.057 -12.2484 -5.274 -3.506 -5.66485 -1.571 -3.270 -3.55221 -2.330 -2.380 -6.13763 -2.249 -2.041 -4.71023 -0.595 -0.314 -3.16497 -0.350 -1.409 -1.4108 氢键。量贡献一个更直观的表征，通过色阶及能量贡献热图，如图 2.7 所示，黑色方框为 Ile97、Ile140 和 Phe101。
【参考文献】：
期刊论文
[1]新烟碱类杀虫剂对蜜蜂行为与生理影响的研究进展[J]. 李梦,李志国,和静芳,苏松坤. 福建农林大学学报(自然科学版). 2016(05)
[2]家蚕化学感受蛋白CSP16的表达及结合特性分析[J]. 郭兴国,陈莹,邢秋婷,邢万静,阚云超,乔惠丽. 昆虫学报. 2016(06)
[3]中华蜜蜂报警信息素的生物活性检测[J]. 李新宇,董诗浩,谭垦. 中国蜂业. 2016(04)
[4]中华蜜蜂信息素结合蛋白OBP10的基因克隆、原核表达和配基结合特性分析[J]. 吴帆,黄君君,谭静,唐明珠,李红亮. 昆虫学报. 2016(01)
[5]Q型烟粉虱化学感受蛋白CSP1与植物挥发物的结合特征[J]. 吴帆,张晓曼,赵磊,崔旭红,李红亮,罗晨. 中国农业科学. 2015(10)
[6]吡虫啉对意大利蜜蜂脑乙酰胆碱受体分布的影响[J]. 周婷,宋怀磊,王强,代平礼,吴艳艳,孙继虎. 昆虫学报. 2013(11)
[7]中华蜜蜂性信息素结合蛋白ASP1的原核表达及配基结合特性分析[J]. 翁琛,张林雅,赵磊,付余霞,罗晨,李红亮. 昆虫学报. 2013(10)
[8]中华蜜蜂普通气味结合蛋白ASP2的气味结合功能模式分析[J]. 李红亮,张林雅,庄树林,倪翠侠,韩宝瑜,商晗武. 中国农业科学. 2013(01)
[9]中华蜜蜂Orco嗅觉受体基因的克隆、表达及亚细胞定位[J]. 张林雅,谢冰花,倪翠侠,赵磊,李红亮,商晗武. 昆虫学报. 2012(11)
[10]中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展[J]. 孟飞,胥保华,郭兴启. 应用昆虫学报. 2012(05)
硕士论文
[1]中华蜜蜂两种嗅觉相关蛋白的基因克隆与功能研究[D]. 张林雅.中国计量学院 2013
本文编号：3523710
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