四川省猕猴桃溃疡病菌遗传多样性及变异分析

发布时间：2021-12-29 07:36

　　猕猴桃溃疡病是一种严重危害猕猴桃生长的细菌性病害,其主要的致病菌为丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)。由于病原菌自身的变异、相互间的基因交流、外界环境的影响以及寄主的相互作用等因素导致病原菌的遗传信息发生变化,使病害的流行及控制变得更为复杂。四川省作为猕猴桃种植大省,面临着溃疡病更为流行及蔓延的形势。本研究针对猕猴桃主要产区的猕猴桃溃疡病菌进行分离鉴定,进而研究其遗传多样性,主要结论如下。(1)本研究首次从广元、成都、邛崃、雅安等猕猴桃主要产区采集疑似猕猴桃溃疡病样品142份,通过分离培养鉴定获得77个Psa菌株,和3个假单胞属菌株(Pseudomonas),不同病原菌形态具有细微差异。(2)通过BOX-PCR和EIRC-PCR对80个菌株进行了遗传多样性分析。在相似系数分别为0.631和0.661时,两种方法均将80个菌株聚为6类,聚类结果与菌株地理分布呈一定相关性。(3)通过对11个VNTR位点的多态性分析表明,1个为轻微变异位点,5个为中度变异位点,5个为高度变异位点,在相似系数为0.778时,该方法将80...

【文章来源】： 四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：86 页

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 文献综述
        1.1.1 猕猴桃溃疡病研究现状
        1.1.2 猕猴桃溃疡病病原菌的研究概况
        1.1.3 猕猴桃溃疡病群体遗传多样研究
        1.1.4 遗传变异研究方法
        1.1.5 猕猴桃溃疡病病原菌致病性测定研究
    1.2 研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 菌株采集
    2.2 技术路线
    2.3 试验试剂与仪器
        2.3.1 试验试剂
        2.3.2 试验仪器
    2.4 试验方法
        2.4.1 病原细菌的分离培养
        2.4.2 单菌落PCR
        2.4.3 病原菌的纯化及DNA提取
        2.4.4 BOX-PCR和EIRC-PCR扩增
        2.4.5 MLVA的分子分型研究
        2.4.6 遗传变异分析
        2.4.7 代表性菌株的致病性测定
3 结果与分析
    3.1 样品采集
    3.2 猕猴桃溃疡病菌的分离培养及分子鉴定
        3.2.1 猕猴桃溃疡病菌的分离培养
        3.2.2 分子鉴定
    3.3 基于BOX-PCR和EIRC-PCR的遗传多样性分析
        3.3.1 BOX-PCR扩增结果
        3.3.2 EIRC-PCR扩增结果
    3.4 MLVA分子分型研究
        3.4.1 VNTR多态性位点筛选
        3.4.2 毛细管电泳结果
        3.4.3 VNTR多态性位点的多态性信息含量分析及PIC值计算
        3.4.4 UPGMA聚类分析
    3.5 基于持家基因序列的遗传变异分析
        3.5.1 持家基因序列获得
        3.5.2 系统发育树的构建
        3.5.3 同义突变与非同义突变(不同持家基因选择压力分析)
        3.5.4 中性检验
        3.5.5 基因流和遗传分化的统计分析
    3.6 致病性测定
4 结论与讨论
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]酶联免疫吸附反应对猕猴桃溃疡病菌效应子Hopz5多克隆抗体的特性分析 [J]. 胡月,陈航,杨巽喆,李庆,杨辉.  生物技术通报. 2018(01)
[2]猕猴桃溃疡病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用 [J]. 谢锦添,俞超,谭志文,吴月燕,马立孟.  中国南方果树. 2017(06)
[3]猕猴桃溃疡病病菌新筛选方法与菌种鉴定 [J]. 田璨熙,宋金秋,向晓寒,崔丽红.  西南农业学报. 2017(11)
[4]四川省猕猴桃溃疡病发生现状及绿色防控技术体系的建立 [J]. 马利,尹勇,封传红,任小平,龚国淑,陈华保,庄启国,涂美艳,王华.  中国植保导刊. 2017(11)
[5]浅谈周至县猕猴桃溃疡病综合防治技术 [J]. 袁香丽.  农民致富之友. 2016(20)
[6]秦岭北麓猕猴桃主产区溃疡病病原菌的分离与鉴定 [J]. 井赵斌,杨宏勃,杨玉旺,沈静,周素敏,颜瑞莉,徐明.  西北林学院学报. 2016(05)
[7]四种杀菌剂防治猕猴桃溃疡病的效果及田间应用技术 [J]. 秦虎强,赵志博,高小宁,王强,杜培龙,黄丽丽.  植物保护学报. 2016(02)
[8]猕猴桃冻害预防及灾后挽救建议 [J]. 涂美艳,江国良,陈栋,孙淑霞,李靖.  四川农业科技. 2016(03)
[9]陕西省猕猴桃细菌性溃疡病菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)Rep-PCR的遗传多样性分析 [J]. 高小宁,郑州,赵志博,秦虎强,黄丽丽.  果树学报. 2016(03)
[10]猕猴桃溃疡病菌漆酶基因的克隆与功能分析 [J]. 刘普,胡家勇,何蓉,朱立武.  生物学杂志. 2015(01)

博士论文
[1]烟草脉带花叶病毒、芜菁花叶病毒和马铃薯Y病毒的遗传结构分析[D]. 张成玲.山东农业大学. 2010

硕士论文
[1]猕猴桃溃疡病抗性材料评价及其亲缘关系的ISSR聚类分析[D]. 刘娟.四川农业大学. 2015
[2]应用GFPuv标记技术研究猕猴桃溃疡病菌在组织中的侵染扩展动态[D]. 黄其玲.西北农林科技大学. 2013
[3]炭疽芽孢杆菌MLVA分子分型研究[D]. 吴松羽.南昌大学. 2011



本文编号：3555686