鞘脂菌中双组分单加氧酶MeaXY基因的克隆及其功能研究
发布时间：2021-12-31 01:45
由于在过去的六十年中氯乙酰胺类除草剂的大量使用,微生物已经进化出矿化这些化合物的途径。在氯乙酰胺类除草剂微生物代谢的上游途径中,通过N-脱烷基和酰胺水解转化为两种常见的代谢产物2-甲基-6-乙基-苯胺（MEA）和2,6-二乙基苯胺（DEA）。下游途径中MEA代谢是由芳香环羟基化起始,经过几步转化成为开环底物。整个途径中大多数的上游基因已经被确定,而负责MEA初始羟基化及开环的基因却还未报道,对此我们展开了以下研究:1.MEA代谢突变菌株的获得及其代谢途径分析本研究以能完全矿化MEA的菌株Sphingobium baderi DE-13为出发菌株,通过连续传代获得两株代谢MEA的突变菌株DE-13-D2和DE-13-E9。其中菌株DE-13-D2失去了完全矿化MEA的能力,能转化MEA并积累中间物质,而菌株DE-13-E9则完全失去MEA降解能力。利用HPLC-MS/MS的方法对突变菌株DE-13-D2代谢MEA所积累的中间物进行鉴定,经MS/MS分析鉴定出:4-羟基-2-甲基-6-乙基苯胺（4-OH-MEA）,2,6-甲乙基对苯醌亚胺（MEBQI）,2,6-甲乙基对苯二酚（MEHQ）。...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－６苯胺双加氣酶基因蔟示意图??Ｆｉｇ．?１－６?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?ａｎｉｌｉｎｅ．??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]化学除草剂对环境的影响及解决对策[J]. 杨林森. 江西农业. 2017(01)
[2]酰胺类除草剂安全剂作用机理及研究应用进展[J]. 李瑾,刘秀,金晨钟,陈靖宇,黄维,荣蓉,唐彩红,谢鹏. 现代农业科技. 2016(21)
[3]乙草胺对种子发芽率的影响[J]. 刘露. 南方农业. 2016(21)
[4]氯代乙酰类除草剂的微生物降解研究进展[J]. 田小四,刘远. 安徽农学通报. 2016(11)
[5]丁草胺对小白鼠空间记忆能力的影响[J]. 陈慧博,王彦虎. 转化医学电子杂志. 2016(02)
[6]乙草胺对大鼠肝脏氧化性应激状态的影响[J]. 李龙雪,郑晶,徐艺华,庚天琦,张旸. 中华疾病控制杂志. 2016(01)
[7]环境激素甲草胺对摇蚊谷胱甘肽硫转移酶的抑制作用[J]. 李修伟,校新蕾,梁亚萍,张春萍,张淑兰,谷祖敏,祁之秋. 生态毒理学报. 2015(02)
[8]5种酰胺类除草剂对斑马鱼胚胎发育的毒性效应[J]. 刘迎,胡燕,姜蕾,潘波,秦涵淳,林勇. 农药. 2014(11)
[9]2,6-二甲酚气相催化胺化合成2,6-二甲基苯胺研究[J]. 胡卫平,王晓光,廖文文,刘志海,陈强,俞建平,虞卉,刘智凌. 精细化工中间体. 2014(03)
[10]苯胺降解菌Rhodococcus sp.E2的分离与苯胺氧化酶基因簇的初步鉴定[J]. 李云翔,陈雪婷,周潮洋,裴涛,刘永闯,洪青,闫新,李顺鹏. 农业环境科学学报. 2014(05)
博士论文
[1]三种酰胺类除草剂对热带爪蟾（Xenopus tropicalis）早期发育致畸效应及DNA损伤研究[D]. 李贤宾.浙江大学 2010
硕士论文
[1]油菜和小麦种苗根系对乙草胺耐性差异的分析[D]. 汪梦竹.西北农林科技大学 2016
[2]苯胺降解菌的筛选鉴定、降解特性以及共代谢研究[D]. 张浩.太原理工大学 2015
[3]fmo同源蛋白基因的克隆及功能分析[D]. 刘飞宏.重庆理工大学 2015
[4]Sphingomonads中苯胺双加氧酶基因簇ado的鉴定[D]. 李云翔.南京农业大学 2014
[5]除草剂丁草胺对中华大蟾蜍脑及肝脏的毒性研究[D]. 邵然.沈阳师范大学 2011
[6]乙草胺在水中光化学降解机理研究[D]. 徐利.安徽农业大学 2003
本文编号：3559389
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：104 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－６苯胺双加氣酶基因蔟示意图??Ｆｉｇ．?１－６?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?ａｎｉｌｉｎｅ．??
?ＤＥ－１３的突变株，能转化ＭＥＡ和ＤＥＡ并累积中间产物??ＰＣＲ扩增提取的质粒ＤＮＡ的结果如图２－１所示。将１６Ｓ?ｒＲＮＡ测序的结果上传??至ｅｚｔａｘｏｎ网站进行在线的比对，发现两株菌的１６Ｓ?ｒＲＮＡ与画序列??一致性为１００％，因此确认菌株无误后－７０°Ｃ甘油管保存。??Ｍ?１?２?３?４??２０００?二、…々：：人心？＇丄??１５００?：ｔ?４??ｌｏｏｏ??图２－１菌株ＤＥ－１３－Ｄ２、ＤＥ－１３－Ｅ９的的１６Ｓ?ｒＲＮＡ电泳图谱??Ｆｉｇ．?２－１?Ａｇｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｃｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＲＮＡ．??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ?；】：ｃｋ＋；２：ｃｋ－；?３：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＥ－１３－Ｄ２?；４：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ??ＤＥ－１３－Ｅ９．??两株ＭＥＡ和ＤＥＡ代谢突变菌株ＤＥ－１３－Ｅ９和ＤＥ－１３－Ｄ２和野生菌株ＤＥ－１３对??ＭＥＡ的降解情况见图２－２所示。可以看出ＤＥ－１３野生菌株可以完全降解ＭＥＡ，突变??菌株ＤＥ－１３－Ｅ９不能降解ＭＥＡ，而突变菌株ＤＥ－１３－Ｄ２代谢ＭＥＡ积累产物，该产物??在２６０?ｎｍ处有特征吸收峰。??２?５０
?ＤＥ－１３的突变株，能转化ＭＥＡ和ＤＥＡ并累积中间产物??ＰＣＲ扩增提取的质粒ＤＮＡ的结果如图２－１所示。将１６Ｓ?ｒＲＮＡ测序的结果上传??至ｅｚｔａｘｏｎ网站进行在线的比对，发现两株菌的１６Ｓ?ｒＲＮＡ与画序列??一致性为１００％，因此确认菌株无误后－７０°Ｃ甘油管保存。??Ｍ?１?２?３?４??２０００?二、…々：：人心？＇丄??１５００?：ｔ?４??ｌｏｏｏ??图２－１菌株ＤＥ－１３－Ｄ２、ＤＥ－１３－Ｅ９的的１６Ｓ?ｒＲＮＡ电泳图谱??Ｆｉｇ．?２－１?Ａｇｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｃｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＲＮＡ．??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ?；】：ｃｋ＋；２：ｃｋ－；?３：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＥ－１３－Ｄ２?；４：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ??ＤＥ－１３－Ｅ９．??两株ＭＥＡ和ＤＥＡ代谢突变菌株ＤＥ－１３－Ｅ９和ＤＥ－１３－Ｄ２和野生菌株ＤＥ－１３对??ＭＥＡ的降解情况见图２－２所示。可以看出ＤＥ－１３野生菌株可以完全降解ＭＥＡ，突变??菌株ＤＥ－１３－Ｅ９不能降解ＭＥＡ，而突变菌株ＤＥ－１３－Ｄ２代谢ＭＥＡ积累产物，该产物??在２６０?ｎｍ处有特征吸收峰。??２?５０
【参考文献】：
期刊论文
[1]化学除草剂对环境的影响及解决对策[J]. 杨林森. 江西农业. 2017(01)
[2]酰胺类除草剂安全剂作用机理及研究应用进展[J]. 李瑾,刘秀,金晨钟,陈靖宇,黄维,荣蓉,唐彩红,谢鹏. 现代农业科技. 2016(21)
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[5]丁草胺对小白鼠空间记忆能力的影响[J]. 陈慧博,王彦虎. 转化医学电子杂志. 2016(02)
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[7]环境激素甲草胺对摇蚊谷胱甘肽硫转移酶的抑制作用[J]. 李修伟,校新蕾,梁亚萍,张春萍,张淑兰,谷祖敏,祁之秋. 生态毒理学报. 2015(02)
[8]5种酰胺类除草剂对斑马鱼胚胎发育的毒性效应[J]. 刘迎,胡燕,姜蕾,潘波,秦涵淳,林勇. 农药. 2014(11)
[9]2,6-二甲酚气相催化胺化合成2,6-二甲基苯胺研究[J]. 胡卫平,王晓光,廖文文,刘志海,陈强,俞建平,虞卉,刘智凌. 精细化工中间体. 2014(03)
[10]苯胺降解菌Rhodococcus sp.E2的分离与苯胺氧化酶基因簇的初步鉴定[J]. 李云翔,陈雪婷,周潮洋,裴涛,刘永闯,洪青,闫新,李顺鹏. 农业环境科学学报. 2014(05)
博士论文
[1]三种酰胺类除草剂对热带爪蟾（Xenopus tropicalis）早期发育致畸效应及DNA损伤研究[D]. 李贤宾.浙江大学 2010
硕士论文
[1]油菜和小麦种苗根系对乙草胺耐性差异的分析[D]. 汪梦竹.西北农林科技大学 2016
[2]苯胺降解菌的筛选鉴定、降解特性以及共代谢研究[D]. 张浩.太原理工大学 2015
[3]fmo同源蛋白基因的克隆及功能分析[D]. 刘飞宏.重庆理工大学 2015
[4]Sphingomonads中苯胺双加氧酶基因簇ado的鉴定[D]. 李云翔.南京农业大学 2014
[5]除草剂丁草胺对中华大蟾蜍脑及肝脏的毒性研究[D]. 邵然.沈阳师范大学 2011
[6]乙草胺在水中光化学降解机理研究[D]. 徐利.安徽农业大学 2003
本文编号：3559389
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