家蚕BmSpatzle4新剪接异构体的发现及其在体壁中对不同微生物的免疫响应

发布时间：2022-02-19 04:25

　　在本研究中,我们克隆了1567bp的BmSpatzle4（BmSpz4）cDNA,其中包含一个完整的1386 bp开放阅读框,编码461个氨基酸,克隆所得序列其ORF比家蚕基因组数据库中预测的BmSpz4（BGIBMGA008841-TA）的ORF长108 bp,在5’端多编码36个氨基酸,其前19个氨基酸为信号肽。信号肽是一种存在于大部分的新合成的蛋白质的N端的短肽,信号肽引导新合成的蛋白质向分泌通路转移,在分泌蛋白质的过程中起着非常重要的作用。BmSpz4基因位于3号染色体的Bm_scaf174上,在基因组中只有1个拷贝。BmSpz4基因共有6个外显子、5个内含子,BmSpz4包含了一个Spatzle域。ExPASy预测BmSpz4蛋白的分子量为53.19 kDa,等电点为5.56。ProtScale氨基酸序列的疏水性分析表明,BmSpz4蛋白的最大疏水性为3.333,最小值为-3.011,蛋白质序列的疏水和亲水区交错。BmSpz4的氨基酸序列与冈比亚按蚊、大蜜蜂、果蝇、丽蝇蛹集金小蜂、赤拟谷盗Spz有着较近的亲缘关系。从初步的研究结果判断BmSpz4存在着两种... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 研究背景
    1.2 国内外研究现状
        1.2.1 物理防御
        1.2.2 免疫识别
        1.2.3 细胞免疫
        1.2.4 体液免疫
    1.3 研究内容
    1.4 研究意义
第2章 家蚕BmSpz4基因的克隆及序列分析
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 提取家蚕表皮总RNA
        2.2.4 反转录PCR
        2.2.5 琼脂糖凝胶电泳
        2.2.6 PCR产物切胶回收
        2.2.7 目的片段与pMD18-T载体的连接
        2.2.8 质粒DNA的转化
        2.2.9 抽提重组质粒DNA
        2.2.10 重组质粒DNA的酶切鉴定
        2.2.11 BmSpz4生物信息学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 BmSpz4基因的克隆及测序
        2.3.2 信号肽
        2.3.3 选择性剪接
        2.3.4 系统发育分析
    2.4 本章小结与讨论
第3章 家蚕BmSpz4基因在组织中的表达情况
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 引物设计
        3.2.3 提取家蚕各组织总RNA
        3.2.4 半定量反转录PCR
        3.2.5 琼脂糖凝胶电泳
    3.3 结果与分析
    3.4 本章小结与讨论
第4章 BmSpz4基因经不同微生物诱导后的表达情况
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 引物设计
        4.2.3 注射微生物
        4.2.4 提取家蚕体壁总RNA
        4.2.5 半定量反转录PCR
        4.2.6 琼脂糖凝胶电泳
    4.3 结果与分析
    4.4 本章小结与讨论
第5章 对BmSpz4基因进行RNA干扰后抗菌肽的表达情况
    5.1 引言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 引物设计
        5.2.3 制备双链RNA
        5.2.4 注射 dsRNA
        5.2.5 提取总RNA
        5.2.6 半定量反转录PCR
        5.2.7 琼脂糖凝胶电泳
    5.3 结果与分析
    5.4 本章小结与讨论
结论
参考文献
攻读学位期间发表及待发表的论文
致谢



本文编号：3632213