章鱼胺介导的粘虫幼虫密度依赖的抗病免疫机制研究

发布时间：2022-02-27 22:17

　　免疫功能在昆虫密度依赖的抗病性中起重要作用,但是有关密度依赖的免疫功能调节机制至今仍不清楚。前期研究发现,粘虫存在幼虫密度依赖的抗病性现象。本文从神经激素的角度对粘虫幼虫密度依赖的抗病性机制进行了研究,以期为昆虫密度依赖的抗病性研究提供理论基础。主要研究结果如下:室内条件下（温度23±1 ℃,RH70%±5%,光周期16L:8D）研究了不同密度（1、2、5、10、30头/瓶）饲养的粘虫幼虫对病原菌的抵抗能力及酚氧化酶活力、血细胞数量及溶菌酶活力的变化规律。结果表明:不同密度粘虫幼虫抵抗苏云金芽孢杆菌（Bt）和球孢白僵菌的能力存在显著差异。幼虫感染Bt后的存活率以幼虫密度10头/瓶的最高,且显著高于1、2、5头/瓶的幼虫。幼虫感染球孢白僵菌后的存活率以幼虫密度30头/瓶的最高,显著高于1、2头/瓶。不同密度粘虫幼虫的酚氧化酶活力、血细胞总数的变化规律与幼虫对病原菌的抵抗能力较一致。幼虫酚氧化酶活力以10头/瓶密度下最高,显著高于1和2头/瓶。幼虫血细胞总数以5、10、30头/瓶的显著高于1和2头/瓶。结果表明,不同密度粘虫幼虫酚氧化酶活力和血细胞总数的改变是导致幼虫抗病性增强的主要原因。... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 昆虫密度依赖的抗病性
        1.1 昆虫密度依赖的抗病性现象
        1.2 昆虫密度依赖的抗病免疫功能机制
    2 生物胺
        2.1 昆虫中的三种生物胺及其功能
            2.1.1 章鱼胺
            2.1.2 5-羟色胺
            2.1.3 多巴胺
        2.2 生物胺响应昆虫的压力反应
        2.3 生物胺对甲壳动物及昆虫免疫反应的调控作用
    3 粘虫幼虫密度依赖的抗病性免疫机制研究
    4 研究目的与意义
第二章 幼虫密度对粘虫抗病能力及免疫功能的影响
    1 材料与方法
        1.1 虫源与幼虫密度设置
        1.2 苏云金芽孢杆菌亚致死剂量测定
        1.3 不同密度粘虫幼虫对苏云金芽孢杆菌抵抗能力的测定
        1.4 不同密度粘虫幼虫对球孢白僵菌抵抗能力的测定
        1.5 不同密度粘虫幼虫免疫指标的测定
            1.5.1 粘虫幼虫血淋巴的制备
            1.5.2 血淋巴酚氧化酶活力的测定
            1.5.3 血细胞总数的计数
            1.5.4 溶菌酶含量的测定
        1.6 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 苏云金芽孢杆菌对4龄幼虫的亚致死浓度
        2.2 不同密度粘虫幼虫对苏云金芽孢杆菌的抵抗能力
        2.3 不同密度粘虫幼虫对球孢白僵菌的抵抗能力
        2.4 不同密度粘虫幼虫免疫功能的变化规律
            2.4.1 血淋巴酚氧化酶活力
            2.4.2 血细胞总数
            2.4.3 溶菌酶活性
    3 讨论
第三章 章鱼胺对粘虫幼虫密度依赖的抗病免疫的调节
    1 材料与方法
        1.1 虫源与幼虫密度设置
        1.2 不同密度粘虫幼虫生物胺含量的测定
            1.2.1 粘虫幼虫血淋巴的制备
            1.2.2 幼虫血淋巴章鱼胺、多巴胺、五羟色胺含量的测定
        1.3 注射外源章鱼胺后,粘虫幼虫免疫指标的测定
        1.4 注射章鱼胺受体拮抗剂(依匹斯汀)后,粘虫幼虫免疫指标的测定
        1.5 注射外源多巴胺后,粘虫幼虫免疫指标的测定
        1.6 注射外源章鱼胺后,粘虫幼虫对球孢白僵菌抵抗能力的测定
        1.7 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 密度对粘虫幼虫血淋巴章鱼胺、多巴胺、五羟色胺含量的影响
        2.2 外源章鱼胺对粘虫幼虫免疫功能的影响
        2.3 章鱼胺受体拮抗剂(依匹斯汀)对粘虫幼虫免疫功能的影响
        2.4 外源多巴胺对粘虫幼虫免疫功能的影响
        2.5 外源章鱼胺对粘虫幼虫抵抗球孢白僵菌能力的影响
    3 讨论
第四章 幼虫密度对粘虫章鱼胺合成酶活性及基因表达量的影响
    1 材料与方法
        1.1 虫源与幼虫密度设置
        1.2 不同密度饲养的粘虫幼虫酪氨酸脱羧酶(Tdc)和酪胺-β羟化酶(Tβh)活力的测定
            1.2.1 酶液的制备
            1.2.2 酪氨酸脱羧酶(Tdc)和酪胺-β羟化酶(Tβh)活力的测定
        1.3 不同密度粘虫幼虫酪胺-P羟化酶（Tph)基因表达量的测定
            1.3.1 酪胺-β羟化酶(Tβh)基因片段的克隆
                1.3.1.1 所用试剂
                1.3.1.2 RNA的提取
                1.3.1.3 RNA的反转录
                1.3.1.4 引物设计
                1.3.1.5 片段的扩增
                1.3.1.6 回收与纯化
                1.3.1.7 连接和转化
                1.3.1.8 序列分析
            1.3.2 不同密度粘虫幼虫酪胺-β羟化酶(Tβh)基因mRNA表达水平分析
                1.3.2.2 RNA的提取
                1.3.2.3 反转录
                1.3.2.4 引物设计与合成
                1.3.2.5 实时荧光定量PCR检测
        1.4 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 幼虫密度对幼虫酪氨酸脱羧酶(Tdc)和酪胺-β羟化酶(Tβh)活力的影响
            2.1.1 幼虫密度对粘虫头部Tdc和Tβh活力的影响
            2.1.2 幼虫密度对粘虫幼虫腹部Tdc和Tβh活力的影响
        2.2 不同密度粘虫幼虫酪胺-β羟化酶(Tβh)基因mRNA表达水平分析
            2.2.1 酪胺-β羟化酶(Tβh)基因片段序列的克隆
            2.2.2 幼虫密度对粘虫酪胺-β羟化酶(Tβ h)基因表达的影响
    3 讨论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国粘虫研究现状及发展趋势[J]. 江幸福,张蕾,程云霞,罗礼智.  应用昆虫学报. 2014(04)
[2]东北地区粘虫的季节性迁飞行为(英文)[J]. 张云慧,张智,李超,姜玉英,曾娟,程登发.  昆虫学报. 2013(12)
[3]幼虫密度对草地螟血细胞数量和组成的影响[J]. 杨志兰,程云霞,罗礼智,孔海龙,张蕾,雷朝亮.  昆虫学报. 2013(06)
[4]腰带长体茧蜂寄生对亚洲玉米螟幼虫体内酚氧化酶活性的影响[J]. 冯从经,邱鸿贵,邱中良,符文俊.  昆虫学报. 2004(03)



本文编号：3645389