与SRBSDV P5-1互作的白背飞虱蛋白筛选及功能分析
发布时间：2022-07-01 10:06
南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）是一种经由迁飞性昆虫白背飞虱（Sogatella furcifera）以持久性循回增殖型方式传播的病毒。SRBSDV入侵白背飞虱体内后,需要借助介体体内相关蛋白来完成病毒基质的合成,进而得以复制和增殖。研究表明,SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1是病毒基质的重要组份。因此,为了探索虫体内与病毒P5-1互作的蛋白组份及其在病毒复制中的功能,本文以病毒P5-1作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交技术对白背飞虱的cDNA文库进行筛选,并得到了2个与P5-1互作的蛋白:核糖体蛋白L12（ribosomal protein L12）与烯醇酶（Enolase）。之后,经由PCR扩增得到这两个蛋白的基因全长序列,通过酵母双杂交与双分子荧光互补实验,证实了P5-1与它们的互作关系。进一步地,通过RT-qPCR检测分析了这两个蛋白编码基因在带毒和无毒白背飞虱体内表达水平的差异,为深入解析介体蛋白在病毒基质形成过程中的作用奠定了基础。主要研究结果如下:1、分析了病毒非结构蛋白P5-1的结构及功能...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词及中英文对照
1 前言
1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究现状
1.1.1 病害症状
1.1.2 病毒的寄主
1.1.3 传播介体
1.2 南方水稻黑条矮缩病毒与传毒介体白背飞虱之间的互作关系
1.2.1 病毒基因组结构及其编码的蛋白功能
1.2.2 病毒与白背飞虱互作研究现状
1.3 蛋白互作相关研究技术及进展
1.3.1 酵母双杂交技术
1.3.2 双分子荧光互补技术
1.3.3 其它技术
1.4 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 水稻
2.1.2 南方水稻黑条矮缩病毒
2.1.3 白背飞虱
2.1.4 白背飞虱cDNA文库
2.1.5 酶、载体和菌株
2.1.6 实验仪器及试剂
2.1.7 培养基及溶剂配制
2.2 方法
2.2.1 病毒P5-1 蛋白结构及功能分析
2.2.2 病毒P5-1 基因的克隆及酵母表达载体的构建
2.2.3 白背飞虱cDNA文库的筛选
2.2.4 互作候选蛋白基因的克隆
2.2.5 酵母细胞中互作关系的验证
2.2.6 互作蛋白结构及功能分析
2.2.7 靶标蛋白基因植物表达载体的构建
2.2.8 互作蛋白双分子荧光试验验证
2.2.9 互作蛋白基因在白背飞虱体内的表达水平检测
3 结果与分析
3.1 SRBSDV P5-1 的结构、性质与功能
3.1.1 一级结构
3.1.2 二级结构
3.1.3 性质与功能
3.2 白背飞虱与SRBSDV P5-1 互作的候选蛋白筛选及其基因克隆
3.3 白背飞虱核糖体蛋白L12的生物信息学分析
3.4 白背飞虱烯醇酶的生物信息学分析
3.5 在酵母中验证候选蛋白与SRBSDV P5-1 的互作
3.6 本氏烟中BiFC验证候选蛋白与SRBSDV P5-1 的互作
3.7 白背飞虱体内与病毒P5-1 互作蛋白基因的表达特征
4 结论与讨论
4.1 结论
4.2 讨论
4.2.1 病毒P5-1 招募核糖体蛋白L12的机制及其功能
4.2.2 病毒P5-1 招募烯醇酶的机制及其功能
4.2.3 白背飞虱体内SRBSDV病毒基质形成及功能模型
4.2.4 下一步研究建议
致谢
参考文献
附录A 靶标蛋白基因的核苷酸序列
附录B 攻读学位期间发表的学位论文
附录C 攻读学位期间参加的学术活动
【参考文献】：
期刊论文
[1]抑制南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P5-1的表达阻碍病毒在昆虫体内的增殖[J]. 曹金强,王针针,陈红燕,毛倩卓,贾东升,魏太云. 植物保护学报. 2015(03)
[2]南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白的致病性分析[J]. 陈梅香,章松柏,袁正杰,张松柏,吴祖建,刘勇. 杂交水稻. 2015(03)
[3]GST pull-down联合质谱鉴定BAG结构域相互作用蛋白[J]. 刘冬梅,孙佳楠,邹佳凝,刘明伟,孙璐,刘琼明. 中国生物工程杂志. 2015(04)
[4]南方水稻黑条矮缩病株对非介体稻飞虱-褐飞虱取食行为的影响[J]. 何晓婵,徐红星,周小军,孙裕建,吕仲贤. 植物保护学报. 2015(01)
[5]GST-pulldown技术在蛋白质相互作用中的应用[J]. 柴政斌,张更林,韩金祥. 中国生物制品学杂志. 2014(10)
[6]西南稻区稻飞虱及引起水稻矮缩病病毒的分布研究[J]. 梁燕,吴建祥,齐会会,白玉路,许存宾,周雪平,胡培松,彭云良. 西南农业学报. 2014(04)
[7]双分子荧光互补在蛋白质相互作用中的应用[J]. 任页玫,张蕾,石亚伟. 湖北医药学院学报. 2014(02)
[8]江西省南方水稻黑条矮缩病发生情况及防治建议[J]. 潘华,程奀莲,钟玲,陈齐信,李湘民. 生物灾害科学. 2014(01)
[9]酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白[J]. 徐秋芳,陈晴晴,张金凤,李硕,倪海平,周益军. 中国水稻科学. 2013(06)
[10]双分子荧光互补系统的构建及其在病毒学中的初步应用[J]. 张荣,陈春燕,韦祖樟,袁世山,童光志. 中国动物传染病学报. 2013(03)
博士论文
[1]水稻黑条矮缩病毒基因组S5的编码方式及其编码蛋白的功能研究[D]. 羊健.湖南农业大学 2014
[2]核糖体蛋白RPS26和凋亡相关蛋白Bat3调控p53的分子机制[D]. 崔頔.中国农业大学 2014
[3]南方水稻黑条矮缩病的监测及其病原病毒Pns6与寄主水稻的互作[D]. 章松柏.福建农林大学 2013
[4]南方水稻黑条矮缩病毒与白背飞虱基因互作研究[D]. 薛进.湖南农业大学 2013
[5]灰飞虱体内水稻条纹病毒（RSV）互作因子的筛选及其功能分析[D]. 李硕.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]SRBSDV非结构蛋白P6在病毒侵染白背飞虱过程中的功能分析[D]. 郑胜兰.福建农林大学 2014
[2]两种植物呼肠孤病毒的小管蛋白鉴定及其功能结构域研究[D]. 刘瑛.福建农林大学 2011
本文编号：3654039
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词及中英文对照
1 前言
1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究现状
1.1.1 病害症状
1.1.2 病毒的寄主
1.1.3 传播介体
1.2 南方水稻黑条矮缩病毒与传毒介体白背飞虱之间的互作关系
1.2.1 病毒基因组结构及其编码的蛋白功能
1.2.2 病毒与白背飞虱互作研究现状
1.3 蛋白互作相关研究技术及进展
1.3.1 酵母双杂交技术
1.3.2 双分子荧光互补技术
1.3.3 其它技术
1.4 本研究的目的与意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 水稻
2.1.2 南方水稻黑条矮缩病毒
2.1.3 白背飞虱
2.1.4 白背飞虱cDNA文库
2.1.5 酶、载体和菌株
2.1.6 实验仪器及试剂
2.1.7 培养基及溶剂配制
2.2 方法
2.2.1 病毒P5-1 蛋白结构及功能分析
2.2.2 病毒P5-1 基因的克隆及酵母表达载体的构建
2.2.3 白背飞虱cDNA文库的筛选
2.2.4 互作候选蛋白基因的克隆
2.2.5 酵母细胞中互作关系的验证
2.2.6 互作蛋白结构及功能分析
2.2.7 靶标蛋白基因植物表达载体的构建
2.2.8 互作蛋白双分子荧光试验验证
2.2.9 互作蛋白基因在白背飞虱体内的表达水平检测
3 结果与分析
3.1 SRBSDV P5-1 的结构、性质与功能
3.1.1 一级结构
3.1.2 二级结构
3.1.3 性质与功能
3.2 白背飞虱与SRBSDV P5-1 互作的候选蛋白筛选及其基因克隆
3.3 白背飞虱核糖体蛋白L12的生物信息学分析
3.4 白背飞虱烯醇酶的生物信息学分析
3.5 在酵母中验证候选蛋白与SRBSDV P5-1 的互作
3.6 本氏烟中BiFC验证候选蛋白与SRBSDV P5-1 的互作
3.7 白背飞虱体内与病毒P5-1 互作蛋白基因的表达特征
4 结论与讨论
4.1 结论
4.2 讨论
4.2.1 病毒P5-1 招募核糖体蛋白L12的机制及其功能
4.2.2 病毒P5-1 招募烯醇酶的机制及其功能
4.2.3 白背飞虱体内SRBSDV病毒基质形成及功能模型
4.2.4 下一步研究建议
致谢
参考文献
附录A 靶标蛋白基因的核苷酸序列
附录B 攻读学位期间发表的学位论文
附录C 攻读学位期间参加的学术活动
【参考文献】：
期刊论文
[1]抑制南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P5-1的表达阻碍病毒在昆虫体内的增殖[J]. 曹金强,王针针,陈红燕,毛倩卓,贾东升,魏太云. 植物保护学报. 2015(03)
[2]南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白的致病性分析[J]. 陈梅香,章松柏,袁正杰,张松柏,吴祖建,刘勇. 杂交水稻. 2015(03)
[3]GST pull-down联合质谱鉴定BAG结构域相互作用蛋白[J]. 刘冬梅,孙佳楠,邹佳凝,刘明伟,孙璐,刘琼明. 中国生物工程杂志. 2015(04)
[4]南方水稻黑条矮缩病株对非介体稻飞虱-褐飞虱取食行为的影响[J]. 何晓婵,徐红星,周小军,孙裕建,吕仲贤. 植物保护学报. 2015(01)
[5]GST-pulldown技术在蛋白质相互作用中的应用[J]. 柴政斌,张更林,韩金祥. 中国生物制品学杂志. 2014(10)
[6]西南稻区稻飞虱及引起水稻矮缩病病毒的分布研究[J]. 梁燕,吴建祥,齐会会,白玉路,许存宾,周雪平,胡培松,彭云良. 西南农业学报. 2014(04)
[7]双分子荧光互补在蛋白质相互作用中的应用[J]. 任页玫,张蕾,石亚伟. 湖北医药学院学报. 2014(02)
[8]江西省南方水稻黑条矮缩病发生情况及防治建议[J]. 潘华,程奀莲,钟玲,陈齐信,李湘民. 生物灾害科学. 2014(01)
[9]酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白[J]. 徐秋芳,陈晴晴,张金凤,李硕,倪海平,周益军. 中国水稻科学. 2013(06)
[10]双分子荧光互补系统的构建及其在病毒学中的初步应用[J]. 张荣,陈春燕,韦祖樟,袁世山,童光志. 中国动物传染病学报. 2013(03)
博士论文
[1]水稻黑条矮缩病毒基因组S5的编码方式及其编码蛋白的功能研究[D]. 羊健.湖南农业大学 2014
[2]核糖体蛋白RPS26和凋亡相关蛋白Bat3调控p53的分子机制[D]. 崔頔.中国农业大学 2014
[3]南方水稻黑条矮缩病的监测及其病原病毒Pns6与寄主水稻的互作[D]. 章松柏.福建农林大学 2013
[4]南方水稻黑条矮缩病毒与白背飞虱基因互作研究[D]. 薛进.湖南农业大学 2013
[5]灰飞虱体内水稻条纹病毒（RSV）互作因子的筛选及其功能分析[D]. 李硕.南京农业大学 2012
硕士论文
[1]SRBSDV非结构蛋白P6在病毒侵染白背飞虱过程中的功能分析[D]. 郑胜兰.福建农林大学 2014
[2]两种植物呼肠孤病毒的小管蛋白鉴定及其功能结构域研究[D]. 刘瑛.福建农林大学 2011
本文编号：3654039
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