Cry1Ab13杀虫基因的PCR诱变及功能验证

发布时间：2022-08-01 13:25

　　【目的】通过易错PCR技术克隆一种新的Cry1Ab13基因,以利用Cry类Bt基因提高作物抗虫性,丰富基因资源。【方法】利用易错PCR技术对苏云金芽孢杆菌Cry1Ab13基因进行随机诱变,构建突变体文库,筛选获得突变株Cry1Ab13-1,将该基因构建原核重组表达载体后转化到大肠杆菌中进行异源表达,并利用表达的目的蛋白进行抗虫鉴定。【结果】序列分析表明,突变株Cry1Ab13-1基因序列全长2 036bp,与原始碱基序列的一致性为97.79%,有2个碱基发生突变,导致该基因编码的氨基酸序列中有2个氨基酸改变,分别是第130位由脯氨酸变成丝氨酸,第383位由丝氨酸变成苏氨酸;改变后的氨基酸序列与原始氨基酸序列一致性为96.97%。在线分析表明,该基因与已知过敏源的序列同源性低于35%,不存在致敏性。SDS-PAGE电泳分析表明,表达蛋白分子质量大小为79.5ku,与预期结果相符。抗虫鉴定表明,处理72h时表达的目的蛋白对小菜蛾（Plutella xyllostella）幼虫的致死率达87.88%,明显高于未突变基因对照组的幼虫死亡率;对亚洲玉米螟（Ostrinia nubilalis）幼... 

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 酶和试剂
        1.1.3 供试昆虫
    1.2 方法
        1.2.1 易错PCR扩增
        1.2.2 突变体文库的构建
        1.2.3 原核表达载体的构建
        1.2.4 突变基因在大肠杆菌中的诱导表达
    1.3 杀虫活性的生物鉴定
        1.3.1 小菜蛾幼虫杀虫活性的鉴定
        1.3.2 亚洲玉米螟幼虫杀虫活性鉴定
2 结果与分析
    2.1 Cry1Ab13基因的易错PCR扩增
    2.2 Cry1Ab13突变基因的序列分析
    2.3 突变菌株原核表达载体的构建
    2.4 突变菌株在大肠杆菌中的表达
    2.5 Cry1Ab13-1蛋白杀虫活性的生物鉴定
        2.5.1 小菜蛾杀虫活性鉴定
        2.5.2 亚洲玉米螟杀虫活性鉴定
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[10]优化易错PCR条件以提高毕赤酵母GAP启动子文库突变效率[J]. 秦秀林,钱江潮,储炬.  生物技术通报. 2014(06)



本文编号：3667530