辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性机制及快速检测技术研究

发布时间:2023-02-16 09:42
  灰霉病是当前设施蔬菜生产中的的重大威胁。辽宁省一直以来都是我国的蔬菜的种植大省,在辽宁全省范围内对灰霉病进行研究和防控,对保障蔬菜的正常生产和维护农民利益具有重要的现实意义。本论文以番茄灰霉病为主要研究对象,调查检测了辽宁省地区番茄灰霉病病菌对腐霉利的抗药性现状,而后以对腐霉利产生抗药性的番茄灰霉病病菌菌株为试验素材,鉴别抗性菌株与敏感菌株之间生物学特性上的差异性,并对抗性分子机制进行了研究,寻找分子水平上的差异性,并最终依据这种差异性,利用LAMP方法,建立了快速检测番茄灰霉病病菌对腐霉利的抗药性的分子检测技术,为实现田间抗药性的监测与管理提供一定的技术手段。辽宁省各地区番茄灰霉病菌对腐霉利的抗性菌株已较为普遍,抗药性呈现加重趋势。从辽宁省盘锦、葫芦岛、朝阳、丹东、法库、阜新、普兰店、沈阳等八个地区采集分离的115株番茄灰霉病菌菌株中,抗性菌株96株,抗性频率83.48%。沈阳、盘锦、葫芦岛、朝阳四个地区的抗性频率都高达90%以上。而且,在盘锦和阜新各检测发现1株高抗菌株。辽宁省不同地区间番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性有所差异,但系统聚类分析表明,辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性与菌...

【文章页数】:86 页

【学位级别】:硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一章 番茄灰霉病致病菌研究进展(文献综述)
    1.1 番茄灰霉病菌概述
        1.1.1 番茄灰霉病菌发生规律和侵染循环
        1.1.2 番茄灰霉病菌危害症状
    1.2 番茄灰霉病菌致病机理
        1.2.1 番茄灰霉病菌致病相关酶和基因
        1.2.2 番茄灰霉病菌致病相关毒素
        1.2.3 番茄灰霉病病菌致病过程的信号转导途径
    1.3 番茄灰霉病病菌防治研究
        1.3.1 化学防治
        1.3.2 生物防治
    1.4 番茄灰霉病病菌抗药性研究
        1.4.1 灰葡萄孢抗药性发生概况
        1.4.2 灰葡萄孢对二甲酰亚胺类杀菌剂的抗药性
    1.5 番茄灰霉病病菌抗药性菌株的快速检测
    1.6 论文立题依据和设计思路
第二章 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性现状
    2.1 试验材料
    2.2 试验方法
        2.2.1 菌株的分离纯化
        2.2.2 含药培养基的配制
        2.2.3 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感性的测定
        2.2.4 番茄灰霉病菌对腐霉利抗性指数的测定及其抗性水平的划分
    2.3 结果与分析
        2.3.1 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的敏感性及抗性指数测定
        2.3.2 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性水平、频率及分布
        2.3.3 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性水平的系统聚类分析
    2.4 本章小结
第三章 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性菌株的生物学特性研究..
    3.1 试验材料
    3.2 试验方法
        3.2.1 番茄灰霉病菌菌丝生长对温度敏感性的测定
        3.2.2 番茄灰霉病菌菌丝生长速率的测定
        3.2.3 番茄灰霉病菌产孢量与孢子萌发率的测定
        3.2.4 番茄灰霉病菌微观形态的观察
        3.2.5 番茄灰霉病菌致病力的测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株菌丝生长对温度的敏感性
        3.3.2 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株的菌丝生长速率
        3.3.3 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株的产孢量与孢子萌发率
        3.3.4 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株的微观形态
        3.3.5 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株的致病力
    3.4 本章小结
第四章 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性机制研究
    4.1 试验材料
    4.2 试验方法
        4.2.1 番茄灰霉病菌DNA的提取
        4.2.2 番茄灰霉病菌BcOS1基因片段的PCR引物设计
        4.2.3 番茄灰霉病菌BcOS1基因片段的PCR反应条件
        4.2.4 番茄灰霉病菌BcOS1基因片段的测序及分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 番茄灰霉病菌BcOS1基因片段的PCR扩增与测序
        4.3.2 番茄灰霉病菌对腐霉利敏感及抗性菌株的BcOS1基因片段分析
    4.4 本章小结
第五章 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性菌株的LAMP快速检测体系的建立
    5.1 试验材料
    5.2 试验方法
        5.2.1 番茄灰霉病菌DNA的提取
        5.2.2 引物设计
        5.2.3 LAMP反应体系条件优化
        5.2.4 LAMP反应体系的确立和验证
    5.3 结果与分析
        5.3.1 LAMP引物特异性检测
        5.3.2 LAMP反应体系的优化
        5.3.3 LAMP反应体系的确立及验证
    5.4 本章小结
第六章 结论与讨论
    6.1 结论
        6.1.1 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性现状
        6.1.2 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性菌株的生物学特性研究
        6.1.3 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性机制研究
        6.1.4 辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性菌株的LAMP快速检测体系的建立
    6.2 讨论
        6.2.1 关于辽宁省番茄灰霉病病菌对腐霉利抗药性的讨论
        6.2.2 关于抗药性菌株LAMP快速检测体系建立的讨论
参考文献
附图
致谢
攻读硕士期间发表论文情况



本文编号:3743981

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