木尔坦棉花曲叶病毒编码的V2蛋白特征分析

发布时间：2023-03-01 20:29

　　木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)是一种重要的粉虱传双生病毒,在自然条件下主要由烟粉虱(Bemisia tabaci)以持久循回方式传播。CLCuMuV最早在巴基斯坦木尔坦地区发现,之后扩散到巴基斯坦其他地区及印度等地,给当地的棉花等作物生产造成了惨重的损失。2006年CLCuMuV首次在我国广东朱槿上发现危害,之后陆续在广西、福建、海南、江苏等地发现并报道,成为我国朱槿、黄秋葵、棉花等多种园艺和经济作物安全生产上的重大风险因子之一。CLCuMuV属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)的单组分双生病毒,其基因组为一个单链环状DNA(DNA-A),同时伴随一个β卫星分子CLCuMuB(Cotton leaf curl Multan betasatellite,CLCuMuB)。其中DNA-A包含6个ORF,分别编码V1(CP)、V2、C1(Rep)、C2(TrAP)、C3(REn)和C4蛋白,β卫星只编码一个蛋白(βC1)。许多双生病毒编码的V2蛋白具有参与症状形成、帮助病毒运...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 双生病毒简介
    2 棉花曲叶病
    3 木尔坦棉花曲叶病毒简介
        3.1 木尔坦棉花曲叶病毒发生及危害
        3.2 木尔坦棉花曲叶病毒的基因组结构及功能
    4 V2基因功能研究进展
    5 亚细胞定位在蛋白质功能预测上的应用
    6 酵母双杂交系统
        6.1 酵母双杂交原理
        6.2 酵母双杂交系统的应用
        6.3 酵母双杂交系统的优点及局限性
    7 研究目的与意义
第二章 CLCuMuV V2亚细胞定位特征分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 试剂
        1.3 植物总DNA的提取
        1.4 CLCuMuV V2基因克隆
        1.5 CLCuMuV V2-YFP融合表达载体的构建
        1.6 CLCuMuV V2蛋白的亚细胞定位
        1.7 CLCuMuV V2转录产物的RT-PCR检测
        1.8 CLCuMuV V2蛋白的Western blot分析
    2 结果与分析
        2.1 CLCuMuV V2基因克隆
        2.2 CLCuMuV V2蛋白序列特征分析
        2.3 CLCuMuV V2-YFP融合表达载体的构建
        2.4 CLCuMuV V2蛋白亚细胞定位特征分析
        2.5 V2-YFP的转录及表达检测
    3 讨论
第三章 CLCuMuV V2与病毒编码蛋白的互作
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 试剂
        1.3 植物总DNA的提取
        1.4 CLCuMuV编码基因克隆
        1.5 CLCuMuV基因酵母双杂交载体(AD/BK)的构建
        1.6 酵母菌AH109感受态的制备
        1.7 酵母双杂交验证毒性
        1.8 酵母双杂交验证自激活及互作
    2 结果与分析
        2.1 CLCuMuV编码病毒基因的扩增及克隆
        2.2 CLCuMuV编码基因的酵母双杂交载体构建
        2.3 CLCuMuV编码蛋白对酵母毒性验证及其自激活检测
        2.4 酵母双杂交验证V2与CLCuMuV编码蛋白的互作
    3 讨论
第四章 CLCuMuV V2蛋白自身互作关键区域鉴定
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 试剂
        1.3 V2的缺失突变体构建
        1.4 V2缺失突变体酵母双杂交载体构建
        1.5 酵母双杂交鉴定V2蛋白自身互作关键域
    2 结果与分析
        2.1 V2的缺失突变体构建
        2.2 V2缺失突变体酵母双杂交载体构建
        2.3 酵母双杂交鉴定V2蛋白自身互作关键域
    3 讨论
第五章 棉花GhRPS20的克隆及其与V2的体外互作验证
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 试剂
        1.3 棉花植物总RNA的提取
        1.4 棉花GhRPS20基因克隆
        1.5 GhRPS20酵母双杂交载体构建
        1.6 GhRPS20-AD的毒性及自激活验证
        1.7 GhRPS20与V2的互作验证
    2 结果与分析
        2.1 棉花的GhRPS20基因克隆
        2.2 棉花RPS20序列分析
        2.3 GhRPS20酵母双杂交载体构建
        2.4 GhRPS20对酵母毒性验证及其自激活检测
        2.5 GhRPS20与V2互作验证
    3 讨论
结论与展望
    1 结论
    2 展望
参考文献
附录Ⅰ 常用缓冲液及试剂配制方法
附录Ⅱ 载体图谱
致谢



本文编号：3752190