SLCCNV和MNSV侵染性克隆的构建及致病因子鉴定

发布时间：2023-05-05 23:08

　　甜瓜(Cucumis melo)是我国重要的经济作物之一。近年来,新突发病毒病严重影响甜瓜产业发展。中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus)和甜瓜坏死斑点病毒(melon necrotic spot virus)是中国新近报道为害甜瓜的种。为阐明两种病毒的致病机理,构建了SLCCNV和MNSV两种甜瓜病毒的侵染性克隆,分析了病毒编码的病毒致病因子,以期为防控该病毒病奠定基础。目前取得以下结果:1、鉴定了甜瓜是SLCCNV的新寄主,构建了SLCCNV侵染性克隆并进行了烟粉虱传染试验。测定了SLCCNV-HN全基因组序列并进行了系统进化分析,结果表明SLCCNV-HN甜瓜分离物与SLCCNV-Hn南瓜分离物、SLCCNV-Hn61和SLCCNV-SY西葫芦分离物聚为一类。构建了SLCCNV-HN侵染性克隆载体,接种甜瓜后植株矮化、叶片皱缩。进行了烟粉虱传染试验,发现烟粉虱接种的植株表现出与接种野生型一致的症状。2、明确了AC5基因是SLCCNV的致病因子,证实了AC5是SLCCNV编码的沉默抑制子,其沉默抑制活性与核定位信号相关。将表达AC5基因的PVX...

【文章页数】：137 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 侵染我国葫芦科作物病毒种类
    1.2 SLCCNV研究背景
        1.2.1 双生病毒的发生与为害
        1.2.2 双生病毒分类及基因组结构
        1.2.3 Begomovirus基因组特征及为害
        1.2.4 SLCCNV生物学特征及研究现状
    1.3 MNSV研究背景
        1.3.1 分类地位、特性与分布
        1.3.2 病毒编码的基因及其致病性
        1.3.3 病毒在细胞间的移动
        1.3.4 病毒传播因素
        1.3.5 植物抗病毒研究
        1.3.6 寄主植物响应MNSV入侵的应答反应
    1.4 侵染性克隆载体的构建及应用
        1.4.1 植物病毒侵染性克隆载体构建
        1.4.2 植物病毒侵染性克隆的应用
    1.5 病毒编码的沉默抑制子
        1.5.1 基因沉默
        1.5.2 病毒编码的RNA沉默抑制子及其作用原理
    1.6 本研究的意义及内容
第二章 SLCCNV侵染性克隆的构建
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 田间甜瓜病叶检测
        2.3.2 基因组结构
        2.3.3 基因重组分析
        2.3.4 系统进化分析
        2.3.5 侵染性克隆致病性鉴定及烟粉虱传染
    2.4 讨论
第三章 AC5是SLCCNV编码的致病因子
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 AC5系统进化分析
        3.3.2 AC5的C端激发过敏性坏死反应
        3.3.3 AC5是SLCCNV的致病因子
    3.4 讨论
第四章 SLCCNV AC5沉默抑制功能及其沉默机制
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 AC5抑制局部沉默
        4.3.2 AC5抑制沉默信号的系统运输
        4.3.3 AC5的C端决定沉默活性
        4.3.4 AC5不抑制双链dsRNA沉默
        4.3.5 AC5沉默在蛋白水平起作用
        4.3.6 核定位信号与PTGS关系
    4.4 讨论
第五章 携带GFP的 MNSV侵染性克隆重组载体构建
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3 结果与分析
        5.3.1 5'端和3'端序列分析
        5.3.2 MNSV基因组序列及编码蛋白
        5.3.3 MNSV基因组聚类分析
        5.3.4 侵染性克隆载体的构建
        5.3.5 携带GFP的 MNSV侵染性克隆重组载体
    5.4 讨论
第六章 MNSV p42与寄主因子互作筛选
    6.1 前言
    6.2 材料与方法
        6.2.1 材料
        6.2.2 方法
    6.3 结果与分析
        6.3.1 p42基因致病力鉴定
        6.3.2 p42突变体致病力分析
        6.3.3 整株甜瓜cDNA文库评价
        6.3.4 p42与寄主因子互作筛选
    6.4 讨论
第七章 全文结论及后续研究设想
    7.1 全文结论
    7.2 后续研究设想
参考文献
附录Ⅰ:部分载体图谱
附录Ⅱ:部分试剂
附录Ⅲ:本研究所用引物
附录Ⅳ:作者简介
附录Ⅴ:攻读博士研究生阶段的成绩
致谢



本文编号：3808542