瓜实蝇transformer基因鉴定及性质研究

发布时间：2023-05-10 01:05

　　瓜实蝇Bactrocera cucurbitae(Copuillett)隶属双翅目 Diptera,实蝇科 Tephritidae,果实蝇属Bactrocera Macquar,其繁殖力强,寄生范围广,主要为害葫芦科和茄科植物,已成为世界农业生产上的重要害虫之一。性别决定是影响瓜实蝇生殖、发育的关键因素。transformer(tra)是很多昆虫性别决定中的一个关键基因,特别是在双翅目昆虫中。但迄今为止瓜实蝇性别决定的分子机制尚未不清楚,而且瓜实蝇的transformer尚未得到鉴定。本次研究以瓜实蝇为试验材料,利用RT-PCR结合RACE技术,分离瓜实蝇tra(Bcutra)基因,采用半定量RT-PCR方法研究tra基因在瓜实蝇不同发育时期的表达情况,研究该基因在瓜实蝇性别决定中的可能作用,利用CRISPR/Cas9技术敲除瓜实蝇tra基因,为防治瓜实蝇提供新思路、新方法。在这项研究中,我们从瓜实蝇tra基因中分离和鉴定得到一个雌性特异转录本和二个雄性特异转录本,Bcutra基因的结构已经被确定,并且已经发现在Bcutra中存在多个保守的TRA/TRA-2结合位点。BcuTRA与其他...

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
搪要
Abstract
1 引言
    1.1 瓜实蝇简介
    1.2 昆虫性别决定
    1.3 CRISPR/Cas9技术
    1.4 技术线路
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 供试昆虫
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂盒和试剂
        2.1.4 部分溶液配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 瓜实蝇的饲养
        2.2.2 Bcutra基因鉴定
        2.2.3 Bcutra基因结构分析
        2.2.4 序列分析与进化树构建
        2.2.5 Bcutra不同时间性别发育表达分析
        2.2.6 利用CRISPR/Cas9技术敲除Bcutra基因
3 结果与分析
    3.1 瓜实蝇总RNA提取
    3.2 Bcutra基因中间片段的获得
    3.3 用RACE技术扩增Bcutra基因全长
    3.4 Bcutra基因结构分析
        3.4.1 Bcutra基因组DNA提取与PCR扩增
        3.4.2 Bcutra基因结构和剪接类型
    3.5 瓜实蝇tra基因生物信息学分析
        3.5.1 Bcutra核苷酸序列与氨基酸序列
        3.5.2 Bcutra氨基酸序列比对
        3.5.3 TRA系统发育分析
        3.5.4 BcuTRA氨基酸序列理化性质分析与高级结构预测
    3.6 Bcutra不同发育时间表达分析
        3.6.1 RNA提取
        3.6.2 半定量PT-PCR分析Bcutra不同时期的表达
    3.7 利用CRISPR/Cas9技术敲除Bcutra基因
        3.7.1 Cas9载体线性化
        3.7.2 Cas9 mRNA合成
        3.7.3 sgRNA体外合成
        3.7.4 构建Bcutra基因的靶向编辑模型
4 讨论
5 结论
参考文献
附录
致谢
附件
在读期间与课题有关的研究成果



本文编号：3812734