辅助分子伴侣SlBAG蛋白在番茄抗病反应中的功能研究
发布时间：2023-08-26 05:12
灰葡萄胞菌(Botrytis cinerea),即灰霉菌,是一种腐生病原真菌,它的营养方式为死体营养型,能够侵染上百种单子叶及双子叶植物引起灰霉病,严重危害作物生产、蔬菜质量以及水果保鲜。为了进一步探究番茄对灰霉菌的抗病机制,我们在本实验中采用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)、基因过表达等技术,研究了一个辅助分子伴侣调节因子蛋白家族SlBAG在番茄对灰霉菌抗性反应中的功能以及可能的作用机制。分子伴侣(molecularchaperones)可以在蛋白质折叠、蛋白质质量控制、多亚基蛋白复合体的组装以及蛋白质的运输等过程中发挥重要作用。BAG(Bcl-2-associated athanogene)家族是一个进化上高度保守的辅助分子伴侣蛋白家族,在多种植物、哺乳动物以及酵母菌中均已经发现了其同系物的存在。BAG家族蛋白具有共同的保守结构域,可以调控热激蛋白的功能,也可以与一系列转录因子和信号蛋白等形成复合体从而在各种生理过程中发挥作用。人们在哺乳动物中关于BAG家族的研究开始较早并且已经非常的广泛和深入;在拟南芥和水稻中已经分别鉴定到...
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物与B.cinerea的互作机制
1.1.1 B.cinerea的侵染机制
1.1.2 植物PTI和ETI对B.cinerea的抗性研究
1.1.3 植物细胞坏死调节机制对B.cinerea的抗性研究
1.2 分子伴侣调节因子BAG家族研究进展
1.2.1 BAG家族的发现
1.2.2 植物BAG蛋白结构特征
1.2.3 BAG蛋白在植物抗病中的作用
1.2.4 BAG蛋白在植物生长发育中的作用
1.2.5 BAG蛋白在植物胁迫响应中的作用
1.3 本研究的主要目的和主要内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物材料的培养及处理
2.1.3 生化试剂
2.1.4 载体与菌株
2.2 实验方法
2.2.1 SlBAG家族基因的鉴定与命名
2.2.2 植物总RNA的提取与反转录
2.2.3 基因的克隆鉴定
2.2.4 荧光实时定量PCR表达分析
2.2.5 VIGS体系、依赖病毒的过表达番茄体系的构建
2.2.5.1 病毒介导的基因沉默载体和过表达载体构建
2.2.5.2 利用农杆菌转化法构建基因沉默或过表达体系
2.2.6 本氏烟瞬时过表达体系的建立
2.2.6.1 瞬时过表达载体的构建
2.2.6.2 用农杆菌转化法构建本氏烟瞬时过表达体系
2.2.7 蛋白质免疫印迹分析(Western blot)
2.2.8 灰霉菌的培养与接种
2.2.8.1 灰霉菌的培养
2.2.8.2 灰霉菌的接种
2.2.8.3 灰霉菌病斑大小的统计
2.2.8.4 灰霉菌菌量的测定
2.2.9 DAB染色检测活性氧产生情况
2.2.10 台酚蓝染色检测细胞坏死情况
2.2.11 亚细胞定位
2.2.12 酵母筛库
2.2.13 酵母双杂验证
2.2.14 双分子荧光互补试验
2.2.15 Luciferase实验
2.2.16 免疫共沉淀(Co-IP)试验
2.2.17 化学发光法ROS测定
第三章 番茄SlBAG5在番茄对B.cinerea抗性中的作用
3.1 SlBAG家族基因的鉴定和生物信息学分析
3.1.1 SlBAG家族基因的鉴定
3.1.2 SlBAG家族成员的系统进化树构建
3.1.3 SlBAG家族成员的序列分析
3.1.4 SlBAG家族成员的蛋白结构域分析
3.2 SlBAG家族基因的表达模式分析
3.2.1 SlBAG家族基因组织特异性表达分析
3.2.2 SlBAG家族基因在激素诱导下的表达模式分析
3.2.3 SlBAG家族基因在灰霉菌诱导下的表达模式分析
3.3 SlBAG家族成员的亚细胞定位
3.4 SlBAG家族基因的抗病功能研究
3.4.1 沉默SlBAG5基因增强灰霉菌诱导的番茄抗病反应
3.4.2 在本氏烟中瞬时过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的抗性反应
3.4.3 过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的番茄抗病反应
3.4.4 SlBAG5基因沉默或过表达改变了灰霉菌诱导的SA、JA/ET途径响应基因的表达
3.4.5 SlBAG5基因沉默或过表达影响chitin介导的PTI反应
3.4.6 SlBAG5互作蛋白的筛选
第四章 小结与讨论
4.1 讨论
4.2 展望
参考文献
附录Ⅰ 本文引物序列
本文编号：3844021
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1.1 植物与B.cinerea的互作机制
1.1.1 B.cinerea的侵染机制
1.1.2 植物PTI和ETI对B.cinerea的抗性研究
1.1.3 植物细胞坏死调节机制对B.cinerea的抗性研究
1.2 分子伴侣调节因子BAG家族研究进展
1.2.1 BAG家族的发现
1.2.2 植物BAG蛋白结构特征
1.2.3 BAG蛋白在植物抗病中的作用
1.2.4 BAG蛋白在植物生长发育中的作用
1.2.5 BAG蛋白在植物胁迫响应中的作用
1.3 本研究的主要目的和主要内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 植物材料的培养及处理
2.1.3 生化试剂
2.1.4 载体与菌株
2.2 实验方法
2.2.1 SlBAG家族基因的鉴定与命名
2.2.2 植物总RNA的提取与反转录
2.2.3 基因的克隆鉴定
2.2.4 荧光实时定量PCR表达分析
2.2.5 VIGS体系、依赖病毒的过表达番茄体系的构建
2.2.5.1 病毒介导的基因沉默载体和过表达载体构建
2.2.5.2 利用农杆菌转化法构建基因沉默或过表达体系
2.2.6 本氏烟瞬时过表达体系的建立
2.2.6.1 瞬时过表达载体的构建
2.2.6.2 用农杆菌转化法构建本氏烟瞬时过表达体系
2.2.7 蛋白质免疫印迹分析(Western blot)
2.2.8 灰霉菌的培养与接种
2.2.8.1 灰霉菌的培养
2.2.8.2 灰霉菌的接种
2.2.8.3 灰霉菌病斑大小的统计
2.2.8.4 灰霉菌菌量的测定
2.2.9 DAB染色检测活性氧产生情况
2.2.10 台酚蓝染色检测细胞坏死情况
2.2.11 亚细胞定位
2.2.12 酵母筛库
2.2.13 酵母双杂验证
2.2.14 双分子荧光互补试验
2.2.15 Luciferase实验
2.2.16 免疫共沉淀(Co-IP)试验
2.2.17 化学发光法ROS测定
第三章 番茄SlBAG5在番茄对B.cinerea抗性中的作用
3.1 SlBAG家族基因的鉴定和生物信息学分析
3.1.1 SlBAG家族基因的鉴定
3.1.2 SlBAG家族成员的系统进化树构建
3.1.3 SlBAG家族成员的序列分析
3.1.4 SlBAG家族成员的蛋白结构域分析
3.2 SlBAG家族基因的表达模式分析
3.2.1 SlBAG家族基因组织特异性表达分析
3.2.2 SlBAG家族基因在激素诱导下的表达模式分析
3.2.3 SlBAG家族基因在灰霉菌诱导下的表达模式分析
3.3 SlBAG家族成员的亚细胞定位
3.4 SlBAG家族基因的抗病功能研究
3.4.1 沉默SlBAG5基因增强灰霉菌诱导的番茄抗病反应
3.4.2 在本氏烟中瞬时过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的抗性反应
3.4.3 过表达SlBAG5基因减弱灰霉菌诱导的番茄抗病反应
3.4.4 SlBAG5基因沉默或过表达改变了灰霉菌诱导的SA、JA/ET途径响应基因的表达
3.4.5 SlBAG5基因沉默或过表达影响chitin介导的PTI反应
3.4.6 SlBAG5互作蛋白的筛选
第四章 小结与讨论
4.1 讨论
4.2 展望
参考文献
附录Ⅰ 本文引物序列
本文编号：3844021
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