苦参碱对山核桃干腐病病原真菌（Botryosphaeria dothidea）抑菌机制研究

发布时间：2023-08-29 22:43

　　山核桃干腐病(Botryosphaeria dothidea)是浙江重要经济树种山核桃树的最主要病害,导致超过90%的山核桃树发病,对当地造成了巨大的经济损失。目前针对该病的防治还以戊唑醇和苯醚甲环唑等化学农药为主,尽管这些化学农药可以有效控制山核桃干腐病,但同时也存在增加真菌耐药性和环境污染等诸多问题,因此开发一个新的防治山核桃干腐病的植物源农药迫在眉睫。苦参碱是一种从苦参中提取的喹诺里西啶类生物碱,在防治植物真菌病害方面具有广阔的应用前景,然而由于苦参碱对植物病原真菌的抗真菌活性及其抗真菌机制尚不明确,阻碍了苦参碱制剂的开发和实际应用。鉴于此,本研究测定了苦参碱对山核桃干腐病病原菌的抗真菌活性,并进一步通过探讨苦参碱对真菌细胞膜、呼吸代谢和转录组的影响,阐述其作用机制,最后通过研究苦参碱对抗真菌农药的增效作用,筛选出具有田间应用潜力的组方,为苦参碱在林业上的应用和推广打下坚实理论基础。主要研究结果如下:1.采用菌丝体生长速率法测定了苦参碱对7种林业病原真菌的抑真菌活性,并以最敏感的山核桃干腐病病原菌为研究对象,进一步研究苦参碱对其孢子萌发和菌丝生长的抑制作用。结果显示:苦参碱对山核...

【文章页数】：137 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪论
    1.1 植物源农药研究进展
        1.1.1 植物源杀虫剂
        1.1.2 植物源抗真菌剂
        1.1.3 植物源除草剂、生长调节剂
    1.2 生物碱研究进展
        1.2.1 生物碱抗肿瘤活性
        1.2.2 生物碱抗炎活性
        1.2.3 生物碱抗真菌活性
        1.2.4 生物碱抗病毒活性
    1.3 苦参碱的研究进展
        1.3.1 苦参碱抗真菌活性
        1.3.2 苦参碱杀虫活性
        1.3.3 苦参碱调节植物生长活性
        1.3.4 苦参碱抗癌活性
        1.3.5 苦参碱作用机制
    1.4 山核桃干腐病研究进展
    1.5 转录组学在药物研究中的应用
        1.5.1 新一代测序技术
        1.5.2 转录组技术在抗真菌活性研究中的应用
    1.6 本研究的目的和意义
2 苦参碱对山核桃干腐病病原菌的离体抑菌活性测定
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验药物及仪器
        2.1.2 试验菌种
    2.2 试验方法
        2.2.1 马铃薯固体培养基的配置
        2.2.2 带药培养基的配置
        2.2.3 真菌的活化
        2.2.4 苦参碱对林业病原真菌的抑真菌活性的测定
        2.2.5 苦参碱对山核桃干腐病病原菌孢子萌发的影响
        2.2.6 苦参碱对山核桃干腐病病原菌生物量的影响
        2.2.7 苦参碱的抑真菌作用时间
        2.2.8 数据处理与分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 苦参碱对7种植物病原真菌的抑菌效果观察
        2.3.2 苦参碱对6种病原真菌的抑真菌活性
        2.3.3 苦参碱对山核桃干腐病病原菌孢子萌发的影响
        2.3.4 苦参碱对山核桃干腐病病原菌生长量的影响
        2.3.5 苦参碱的抑真菌作用时间
    2.4 本章小结
3 苦参碱对山核桃干腐病病原菌细胞膜的影响
    3.1 试验材料
        3.1.1 试验药物及仪器
        3.1.2 主要试剂配置
        3.1.3 试验试剂盒
    3.2 试验方法
        3.2.1 带药培养基的配置
        3.2.2 山核桃干腐病病原菌样品的准备
        3.2.3 倒置显微镜观察
        3.2.4 扫描电镜观察
        3.2.5 透射电镜观察
        3.2.6 苦参碱对山核桃干腐病病原菌细胞膜通透性的影响
        3.2.7 总脂质含量测定
        3.2.8 丙二醛含量测定
        3.2.9 活性氧含量测定
        3.2.10 蛋白质含量测定
        3.2.11 保护酶活性测定
    3.3 结果与分析
        3.3.1 倒置显微镜观察苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝形态的影响
        3.3.2 扫描电镜观察苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝形态的影响
        3.3.3 透射电镜观察苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝超微结构的影响
        3.3.4 苦参碱对山核桃干腐病病原菌细胞膜通透性的影响
        3.3.5 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内总脂质含量的影响
        3.3.6 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内丙二醛含量的影响
        3.3.7 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内活性氧含量的影响
        3.3.8 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内蛋白质含量的影响
        3.3.9 苦参碱对山核桃干腐病病原菌保护酶的影响
    3.4 本章小结
4 苦参碱对山核桃干腐病病原菌呼吸代谢的影响
    4.1 试验材料
        4.1.1 试验仪器
        4.1.2 试验试剂盒
        4.1.3 试验菌种
    4.2 试验方法
        4.2.1 带药培养基的配置
        4.2.2 山核桃干腐病病原菌样品的准备
        4.2.3 ATP含量测定
        4.2.4 苦参碱对山核桃干腐病病原菌呼吸代谢的影响
        4.2.5 三羧酸循环相关酶活性的测定
        4.2.6 糖酵解过程相关酶活性的测定
        4.2.7 ATP酶活性测定
        4.2.8 苦参碱对山核桃干腐病病原菌线粒体呼吸作用的影响
        4.2.9 线粒体复合体Ⅰ、Ⅲ活性的测定
        4.2.10 鱼藤酮对苦参碱处理后山核桃干腐病病原菌菌丝体内活性氧含量的影响
    4.3 结果与分析
        4.3.1 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内ATP含量的影响
        4.3.2 苦参碱对呼吸代谢的影响
        4.3.3 苦参碱对山核桃干腐病病原菌三羧酸循环的影响
        4.3.4 苦参碱对山核桃干腐病病原菌糖酵解过程的影响
        4.3.5 苦参碱对山核桃干腐病病原菌菌丝体内ATP酶活性的影响
        4.3.6 苦参碱对山核桃干腐病病原菌线粒体呼吸作用的影响
        4.3.7 苦参碱对山核桃干腐病病原菌线粒体复合体Ⅰ、Ⅲ活性的影响
        4.3.8 鱼藤酮对苦参碱处理后山核桃干腐病病原菌菌丝体内活性氧含量的影响
    4.4 本章小结
5 苦参碱抑制山核桃干腐病病原菌的转录组分析
    5.1 试验材料
        5.1.1 试验仪器
        5.1.2 主要试剂
        5.1.3 试验菌种
    5.2 试验方法
        5.2.1 转录组样品的制备
        5.2.2 山核桃干腐病病原菌总RNA的提取及其质量鉴定
        5.2.3 转录组数据的测序及其质量控制
        5.2.4 转录组测序数据的组装及评估
        5.2.5 基因功能注释
        5.2.6 基因表达量分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 山核桃干腐病病原菌RNA的质量检测
        5.3.2 测序数据的质量控制
        5.3.3 测序结果组装
        5.3.4 Unigene功能注释
        5.3.5 差异表达分析
        5.3.6 转录组数据的深入比较分析
    5.4 本章小结
6 苦参碱对杀菌剂抗山核桃干腐病病原菌的增效作用
    6.1 试验材料
        6.1.1 试验仪器
        6.1.2 试验试剂
        6.1.3 试验菌种
    6.2 试验方法
        6.2.1 化学农药单剂对山核桃干腐病病原菌抑菌效果测定
        6.2.2 八种化学农药对山核桃干腐病病原菌的毒力回归方程和IC₅₀值
        6.2.3 苦参碱与8种化学农药间的增效作用试验
        6.2.4 苦参碱与甲基托布津的联合毒力测定
    6.3 结果与分析
        6.3.1 八种化学农药对山核桃干腐病病原菌的毒力回归方程和IC₅₀值
        6.3.2 最佳复配组合的筛选
        6.3.3 苦参碱与甲基托布津最佳复配比例的筛选
    6.4 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
附件



本文编号：3844430