梨褪绿叶斑相关病毒RT-PCR检测技术的建立及病毒对梨离体植株生根影响的分析
发布时间：2023-12-05 18:54
苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorototic leaf spot virus,ACLSV)是侵染梨的3种常见病毒,这些病毒在梨树上经常复合侵染,影响树体的生长及产品质量。此外,本实验室前期利用深度测序从梨树上鉴定并得到了一种新的欧洲山梣环斑病毒属(Emaravirus)的病毒,受该病毒侵染的梨树叶片呈现半透明的褪绿斑,将其暂命名为梨褪绿叶斑相关病毒(Pear chlorototic leaf spot-associated virus,PCLSaV),该病毒基因组是由5条负义单链RNA组成。本研究根据前期获得的PCLSaV序列设计了不同引物,以建立有效的RT-PCR检测技术,用于梨离体植株与田间样品的PCLSaV检测。同时对3个梨品种的带病毒与无病毒离体植株的生根效率以及移栽成活率等生长特性进行了比较。取得的主要结果如下:1.根据已获得的PCLSaV基因组RNA3的序列设计了2套用于巢式RT-PCR(nRT-PCR)扩增的引物...
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略表语
第一章 文献综述
1.1 侵染梨的常见病毒及其危害特点
1.1.1 苹果茎沟病毒
1.1.2 苹果茎痘病毒
1.1.3 苹果褪绿叶斑病毒
1.2 Emaravirus属病毒及分子特征
1.2.1 Emaravirus属病毒分类地位及病毒种类
1.2.2 基因组结构及分子特点
1.3 PCLSaV的生物学特性及危害特点
1.3.1 PCLSaV的生物学特性
1.3.2 PCLSaV的危害特点
1.4 病毒侵染对植物生长及生根的影响
1.4.1 病毒侵染对植物生长的影响
1.4.2 病毒侵染对植物生根的影响
1.5 研究目的与意义
第二章 PCLSaV的 RT-PCR检测技术建立与应用
2.1 研究材料
2.1.1 样品来源
2.1.2 主要试剂
2.2 研究方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 梨叶片的总RNA提取
2.2.3 RT-PCR扩增
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳
2.3 结果与分析
2.3.1 随机引物反转录PCR及 nPCR检测PCLSaV的效果
2.3.2 特异引物反转录PCR及 nPCR检测PCLSaV的效果
2.3.3 不同反转录引物及检测引物用于PCR和 nPCR检测PCLSaV的效果比较
2.4 小结与讨论
第3章 梨离体植株PCLSaV的检测
3.1 研究材料
3.2 主要试剂
3.3 研究方法
3.3.1 离体植株叶片采集
3.3.2 梨叶片的总RNA提取
3.3.3 检测4 种病毒所用的引物
3.3.4 RT-PCR检测PCLSaV
3.3.5 巢式多重RT-PCR检测ASGV、ASPV和 ACLSV
3.3.6 琼脂糖凝胶电泳
3.4 结果与分析
3.4.1 巢式多重RT-PCR检测梨离体植株的ASGV、ASPV和 ACLSV
3.4.2 梨离体植株PCLSaV的巢式RT-PCR检测
3.5 讨论
第四章 病毒对梨离体植株生根及移栽的影响
4.1 研究材料
4.1.1 材料来源
4.1.2 主要试剂
4.2 研究方法
4.2.1 激素的配置
4.2.2 MS培养基的配置
4.2.3 生根培养基的配置
4.2.4 离体植株的生根诱导
4.2.5 炼苗与移栽
4.2.6 数据分析
4.3 结果与分析
4.3.1 巴梨无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.1.1 巴梨无毒与带毒离体植株生根特性的观察与比较
4.3.1.2 巴梨无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.3.2 红茄梨无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.2.1 红茄梨无毒与带毒离体植株生根效果的比较
4.3.2.2 红茄梨无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.3.3 色尔克甫无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.3.1 色尔克甫无毒与带毒离体植株生根效果的比较
4.3.3.2 色尔克甫无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.4 讨论
第五章 结论与展望
参考文献
附录
致谢
本文编号：3870701
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略表语
第一章 文献综述
1.1 侵染梨的常见病毒及其危害特点
1.1.1 苹果茎沟病毒
1.1.2 苹果茎痘病毒
1.1.3 苹果褪绿叶斑病毒
1.2 Emaravirus属病毒及分子特征
1.2.1 Emaravirus属病毒分类地位及病毒种类
1.2.2 基因组结构及分子特点
1.3 PCLSaV的生物学特性及危害特点
1.3.1 PCLSaV的生物学特性
1.3.2 PCLSaV的危害特点
1.4 病毒侵染对植物生长及生根的影响
1.4.1 病毒侵染对植物生长的影响
1.4.2 病毒侵染对植物生根的影响
1.5 研究目的与意义
第二章 PCLSaV的 RT-PCR检测技术建立与应用
2.1 研究材料
2.1.1 样品来源
2.1.2 主要试剂
2.2 研究方法
2.2.1 引物设计
2.2.2 梨叶片的总RNA提取
2.2.3 RT-PCR扩增
2.2.4 琼脂糖凝胶电泳
2.3 结果与分析
2.3.1 随机引物反转录PCR及 nPCR检测PCLSaV的效果
2.3.2 特异引物反转录PCR及 nPCR检测PCLSaV的效果
2.3.3 不同反转录引物及检测引物用于PCR和 nPCR检测PCLSaV的效果比较
2.4 小结与讨论
第3章 梨离体植株PCLSaV的检测
3.1 研究材料
3.2 主要试剂
3.3 研究方法
3.3.1 离体植株叶片采集
3.3.2 梨叶片的总RNA提取
3.3.3 检测4 种病毒所用的引物
3.3.4 RT-PCR检测PCLSaV
3.3.5 巢式多重RT-PCR检测ASGV、ASPV和 ACLSV
3.3.6 琼脂糖凝胶电泳
3.4 结果与分析
3.4.1 巢式多重RT-PCR检测梨离体植株的ASGV、ASPV和 ACLSV
3.4.2 梨离体植株PCLSaV的巢式RT-PCR检测
3.5 讨论
第四章 病毒对梨离体植株生根及移栽的影响
4.1 研究材料
4.1.1 材料来源
4.1.2 主要试剂
4.2 研究方法
4.2.1 激素的配置
4.2.2 MS培养基的配置
4.2.3 生根培养基的配置
4.2.4 离体植株的生根诱导
4.2.5 炼苗与移栽
4.2.6 数据分析
4.3 结果与分析
4.3.1 巴梨无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.1.1 巴梨无毒与带毒离体植株生根特性的观察与比较
4.3.1.2 巴梨无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.3.2 红茄梨无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.2.1 红茄梨无毒与带毒离体植株生根效果的比较
4.3.2.2 红茄梨无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.3.3 色尔克甫无毒与带毒离体植株生根移栽效果的比较
4.3.3.1 色尔克甫无毒与带毒离体植株生根效果的比较
4.3.3.2 色尔克甫无毒与带毒离体植株移栽效果的比较
4.4 讨论
第五章 结论与展望
参考文献
附录
致谢
本文编号：3870701
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