稻纵卷叶螟气味结合蛋白的功能分析
发布时间：2024-10-17 13:09
昆虫的嗅觉在其生命活动过程中起着重要作用,许多研究表明气味结合蛋白(OBPs)参与了识别外界物质的第一步,但对于OBPs在昆虫中确切的生理功能并不是很清晰。稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis是水稻上重要的害虫,我们通过触角转录组测序,鉴定了多个CmedOBPs基因,但对于CmedOBPs在其嗅觉感受中的功能并不是很清晰。为此,本课题拟以稻纵卷叶螟为研究对象,在克隆其CmedOBPs基因及CmedOBPs基因表达模式分析的基础上,通过体外结合实验并结合RNAi技术,对CmedOBPs的功能进行探索,以期为明确稻纵卷叶螟寄主定位的分子机制提供依据。主要研究结果如下:1.稻纵卷叶螟翅和足的扫描电镜观察扫描电镜的结果显示,稻纵卷叶螟雌雄成虫翅上主要有非嗅觉感器鳞形和刺形两种感器。稻纵卷叶螟的足上除了嗅觉感器锥形和毛形感器外还有鳞形感器、刺形感器和Bohm鬃毛3种非嗅觉感器,数量统计显示前足感器多于后足,后足多于中足。雌雄翅及足上的感器无性二型现象。2.稻纵卷叶螟CmedOBPs基因克隆及序列分析本实验成功克隆出 CmedOBP5、CmedOBP8、CmedOBP10、Cm...
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
技术路线
缩略语表
第一章 文献综述
1.1 植物挥发物简介
1.2 昆虫对气味物质的识别
1.3 气味结合蛋白(OBPs)的特征及功能
1.4 OBPs的研究方法
1.5 稻纵卷叶螟简介
1.6 研究目的和意义
第二章 稻纵卷叶螟翅与足的扫描电镜
2.1 材料与方法
2.1.1 供试虫源
2.1.2 样品制备与观察
2.1.3 触角感器的鉴定与命名
2.2 结果与分析
2.2.1 稻纵卷叶螟翅上感器的扫描
2.2.2 稻纵卷叶螟足上感器的扫描
2.3 讨论
第三章 稻纵卷叶螟OBPs基因的克隆及序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 供试试剂
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 稻纵卷叶螟PCR模板的制备
3.1.5 稻纵卷叶螟CmedOBPs基因的克隆
3.2 结果分析
3.2.1 稻纵卷叶螟6个CmedOBPs基因的分析
3.2.2 稻纵卷叶螟OBPs基因的克隆
3.3 讨论
第四章 稻纵卷叶螟OBPs基因的时空表达分析
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.1.4 样品RNA的提取
4.1.5 cDNA第一条链的合成
4.1.6 引物设计及合成
4.1.7 qPCR反应
4.1.8 数据分析
4.2 结果和分析
4.2.1 引物特异性和扩增效率检测
4.2.2 稻纵卷叶螟CmedOBPs基因的时空表达
4.3 讨论
第五章 稻纵卷叶螟OBPs的表达、纯化及结合特性分析
5.1 材料与方法
5.1.1 供试试剂
5.1.2 主要仪器设备
5.1.3 原核表达载体的构建
5.1.4 目的蛋白的表达
5.1.5 荧光竞争结合
5.1.6 荧光猝灭
5.1.7 数据分析
5.2 结果分析
5.2.1 原核表达载体的构建
5.2.2 目的蛋白的表达与纯化
5.2.3 荧光竞争结合
5.2.4 CmedOBP14与挥发物的结合特性
5.2.5 CmedOBP5与挥发物的结合特性
5.2.6 荧光猝灭结果
5.3 讨论
第六章 行为活性物质的筛选
6.1 材料与方法
6.1.1 供试昆虫
6.1.2 实验试剂
6.1.3 主要仪器
6.1.4 CmedOBP14基因的干扰
6.1.5 触角电位(EAG)反应
6.1.6 H型嗅觉实验
6.1.7 数据处理与分析
6.2 结果分析
6.3 讨论
第七章 结果与展望
7.1 主要结果
7.2 展望
参考文献
致谢
本文编号：4008049
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
技术路线
缩略语表
第一章 文献综述
1.1 植物挥发物简介
1.2 昆虫对气味物质的识别
1.3 气味结合蛋白(OBPs)的特征及功能
1.4 OBPs的研究方法
1.5 稻纵卷叶螟简介
1.6 研究目的和意义
第二章 稻纵卷叶螟翅与足的扫描电镜
2.1 材料与方法
2.1.1 供试虫源
2.1.2 样品制备与观察
2.1.3 触角感器的鉴定与命名
2.2 结果与分析
2.2.1 稻纵卷叶螟翅上感器的扫描
2.2.2 稻纵卷叶螟足上感器的扫描
2.3 讨论
第三章 稻纵卷叶螟OBPs基因的克隆及序列分析
3.1 材料与方法
3.1.1 供试昆虫
3.1.2 供试试剂
3.1.3 主要仪器设备
3.1.4 稻纵卷叶螟PCR模板的制备
3.1.5 稻纵卷叶螟CmedOBPs基因的克隆
3.2 结果分析
3.2.1 稻纵卷叶螟6个CmedOBPs基因的分析
3.2.2 稻纵卷叶螟OBPs基因的克隆
3.3 讨论
第四章 稻纵卷叶螟OBPs基因的时空表达分析
4.1 材料与方法
4.1.1 供试昆虫
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.1.4 样品RNA的提取
4.1.5 cDNA第一条链的合成
4.1.6 引物设计及合成
4.1.7 qPCR反应
4.1.8 数据分析
4.2 结果和分析
4.2.1 引物特异性和扩增效率检测
4.2.2 稻纵卷叶螟CmedOBPs基因的时空表达
4.3 讨论
第五章 稻纵卷叶螟OBPs的表达、纯化及结合特性分析
5.1 材料与方法
5.1.1 供试试剂
5.1.2 主要仪器设备
5.1.3 原核表达载体的构建
5.1.4 目的蛋白的表达
5.1.5 荧光竞争结合
5.1.6 荧光猝灭
5.1.7 数据分析
5.2 结果分析
5.2.1 原核表达载体的构建
5.2.2 目的蛋白的表达与纯化
5.2.3 荧光竞争结合
5.2.4 CmedOBP14与挥发物的结合特性
5.2.5 CmedOBP5与挥发物的结合特性
5.2.6 荧光猝灭结果
5.3 讨论
第六章 行为活性物质的筛选
6.1 材料与方法
6.1.1 供试昆虫
6.1.2 实验试剂
6.1.3 主要仪器
6.1.4 CmedOBP14基因的干扰
6.1.5 触角电位(EAG)反应
6.1.6 H型嗅觉实验
6.1.7 数据处理与分析
6.2 结果分析
6.3 讨论
第七章 结果与展望
7.1 主要结果
7.2 展望
参考文献
致谢
本文编号：4008049
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