土壤镰孢菌检测技术的建立及其应用

发布时间：2024-10-23 08:05

　　玉米是我国最重要的粮食作物之一,镰孢菌（Fusarium spp.）能引起多种玉米土传病害,如苗枯病、根腐病、茎腐病和穗腐病等,造成严重的产量损失和品质下降。本文研究了我国玉米主产区田间土样的镰孢菌种群结构及优势致病种,针对镰孢属以及禾谷镰孢复合种建立实时荧光定量PCR检测体系,定量检测土样中镰孢菌的含量,研究了玉米苗枯病病情与土壤含菌量的关系。主要结果如下:1.采用稀释涂布平板法,从全国17个省份的47份玉米田间土样中进行土壤镰孢菌分离,将得到58株镰孢菌进行单孢分离纯化,通过形态学、特异性引物以及ITS、TEF基因测序比对的方法,共鉴定出9种镰孢菌。其中,拟轮枝镰孢（F.verticillioides）(22.41%)、木贼镰孢（F.equiseti）(20.69%)、禾谷镰孢复合种（F.graminearum species complex）(18.97%)分离频率较高,为优势致病镰孢,其余6种镰孢菌包括尖镰孢复合种（F.oxysporum species complex）、锐顶镰孢（F.acuminatum）、层出镰孢（F.proliferatum）、单隔镰孢（F.dimerum...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 镰孢菌引起玉米土传病害概括
        1.1.1 镰孢菌引起的症状
        1.1.2 镰孢菌引起的玉米病害
    1.2 玉米苗枯病的发生概况
        1.2.1 玉米苗枯病的病原
        1.2.2 玉米苗枯病的危害
        1.2.3 玉米苗枯病的流行因素
        1.2.4 玉米苗枯病防治
    1.3 土壤群落检测方法研究进展
        1.3.1 微生物平板培养法
        1.3.2 分子生物学的检测方法
    1.4 实时荧光定量PCR技术
        1.4.1 荧光定量PCR的原理
        1.4.2 荧光定量PCR的分类
        1.4.3 荧光定量PCR的优缺点
        1.4.4 荧光定量PCR的应用
    1.5 研究目的及意义
第2章 土壤镰孢菌的分离鉴定
    2.1 材料
        2.1.1 采集地点
        2.1.2 实验仪器设备
        2.1.3 常用试剂
    2.2 方法
        2.2.1 病原菌的分离
        2.2.2 病原菌的形态鉴定
        2.2.3 病原菌的分子鉴定
        2.2.4 病原菌致病性测定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 镰孢菌形态学鉴定
        2.3.2 镰孢菌分子鉴定
        2.3.3 镰孢种的ITS、TEF基因序列分析
        2.3.4 镰孢菌种的分离频率与地域分布
        2.3.5 镰孢菌致病性鉴定
    2.4 讨论
第3章 镰孢属及禾谷镰孢的RT-qPCR检测
    3.1 材料
        3.1.1 菌株信息
        3.1.2 实验仪器设备
        3.1.3 常用药品
    3.2 方法
        3.2.1 供试菌株DNA提取
        3.2.2 引物设计及特异性灵敏度检测
        3.2.3 RT-qPCR反应体系的建立及优化
        3.2.4 RT-qPCR标准曲线的绘制
    3.3 结果与分析
        3.3.1 引物特异性检测
        3.3.2 引物灵敏度检测
        3.3.3 RT-qPCR标准曲线的建立
    3.4 讨论
第4章 土壤镰孢菌RT-qPCR的验证与应用
    4.1 材料
        4.1.1 菌株信息
        4.1.2 土样信息
        4.1.3 实验仪器设备
        4.1.4 常用试剂
    4.2 方法
        4.2.1 土壤DNA提取
        4.2.2 土壤检测体系的验证
        4.2.3 病害调查与数据分析
        4.2.4 土壤含菌量检测
    4.3 结果与分析
        4.3.1 检测体系的验证
        4.3.2 病害调查与数据分析
        4.3.3 土壤镰孢菌含菌检测及分析
    4.4 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：4008130