烟草丛顶病病原病毒复合体各组分传播特性的研究

发布时间：2024-12-04 22:52

　　烟草丛顶病(Tobacco bushy top disease,TBTD)是一种毁灭性很大的烟草病害,在我国云南省多个烟区流行并造成了严重的经济损失。烟草丛顶病也是我国目前发现的仅此一例由黄症病毒科(Luteoviridae)和幽影病毒属(Umbravirus)病毒复合侵染引起的病害,并且是植物病毒病害。该病害的病毒复合体成分复杂,包含了 5种RNA成分,除了一个尚未定性的病毒RNA之外,其他4种分别是烟草脉扭病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)、烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)这两者为主要致病病毒,以及烟草丛顶病毒卫星RNA(Tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTV SatRNA)和烟草脉扭病毒伴随 RNA(Tobacco vein distorting virus associate RNA,TVDVaRNA)。为了研究该病害病原病毒复合体各组分的传播特性,增加对该植物病毒的各个RNA组分相互作用关系的进一步理解,本文从以下几方面进行了深入的研究:首次明确了 T...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
一、前言
    1.1 烟草丛顶病研究概况
        1.1.1 烟草丛顶病的发生与分布
        1.1.2 烟草丛顶病的病原物
        1.1.3 烟草丛顶病的分子生物学特性
    1.2 烟草丛顶病症状和传播途径
        1.2.1 烟草丛顶病症状
        1.2.2 烟草丛顶病的寄主范围
        1.2.3 烟草丛顶病的传播特性
    1.3 幽影病毒属相关研究进展
        1.3.1 幽影病毒属的基本特性
        1.3.2 幽影病毒属代表病害及基因组特性
            1.3.2.1 花生丛簇病
            1.3.2.2 胡萝卜斑驳病毒
    1.4 黄症病毒科研究进展
        1.4.1 马铃薯卷叶病毒属代表病毒及生物学特性
        1.4.2 马铃薯卷叶病毒
        1.4.3 大麦黄矮病毒
    1.5 植物病毒互作机制的研究
        1.5.1 植物病毒传播特性
        1.5.2 黄症病毒科与幽影病毒属病毒及其卫星RNA在传播中的关系
    1.6 农杆菌介导的病毒侵染性克隆
        1.6.1 农杆菌
        1.6.2 农杆菌渗滤
    1.7 目的与意义
二、材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 供试材料
        2.1.2 相关试剂及仪器
        2.1.3 仪器设备
        2.1.4 溶液配制
    2.2 病毒复合体组分互作研究
        2.2.1 农杆菌浸润实验
            2.2.1.1 质粒提取
            2.2.1.2 GV3101感受态细胞制备
            2.2.1.3 电击转化GV3101感受态细胞
    2.3 TVDV、TBTV、TBTV SatRNA、TVDVaRNA不同组合接种实验
        2.3.1 单菌落培养
        2.3.2 扩大培养
        2.3.3 渗滤Buffer液重悬浮
        2.3.4 农杆菌渗滤接种病毒方法
        2.3.5 植物总RNA的提取
        2.3.6 去除基因组DNA
        2.3.7 RT-PCR检测
        2.3.8 蚜虫传播实验
        2.3.9 提取蚜传烟样总RNA
        2.3.10 RT-PCR检测
    2.4 未定性病毒RNA组分序列鉴定
        2.4.1 制备烟草丛顶病侵染的烟草样品
        2.4.2 病毒粒体的提纯方法:
        2.4.3 未定性病毒RNA组分测序鉴定
            2.4.3.1 RNA质检、定量及纯化
            2.4.3.2 建库
三 结果与分析
    3.1 烟草丛顶病病原病毒复合体各个RNA组分的蚜虫传播关系
        3.1.1 农杆菌渗滤接种侵染实验
            3.1.1.1 各种不同侵染组合总RNA RT-PCR验证
            3.1.1.2 不同侵染组合在本氏烟上的症状
        3.1.2 蚜虫传播实验
            3.1.2.1 本氏烟蚜传烤烟总RNA RT-PCR验证
            3.1.2.2 不同病毒组合经蚜虫从本氏烟向其他烤烟传播后植株症状
            3.1.2.3 不同病毒组合经蚜虫从烤烟向烤烟传播
    3.2 病毒组分RNA5序列鉴定
        3.2.1 病毒提纯
        3.2.2 RNA质检、定量及纯化
四 结论和讨论
    4.1 烟草丛顶病病原病毒复合体各组分不同组合在植物上引起的症状
    4.2 烟草丛顶病病原病毒复合体中各组分的不同组合的蚜虫传播特征
    4.3 在烟草上发现的一种新的呼肠孤病毒
附录一、英文缩略表
附录二、候选序列
参考文献
致谢



本文编号：4014305