番木瓜环斑病毒弱毒株交叉保护防治环斑病毒病的研究

发布时间：2024-12-22 21:59

　　弱毒株交叉保护作用是防治植物病毒病的重要手段。如何获得有效弱毒株是交叉保护作用的关键因素。本研究通过对马铃薯Y病毒属病毒(强、弱毒株)的全长及部分氨基酸序列比对分析,筛选出在亲本强毒株PRSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8个可能与致病性相关的氨基酸突变位点(1309、K481、K598、R728、F753、L754、N787和D944)。采用定点突变技术和Gibson拼接法,分别构建了 4种含有2个突变位点(L754和N787)、4个突变位点(I309、K481、F753和D944)、6个突变位点(1309、K481、F753、L754、N787 和 D944)和 8 个突变位点(1309、K481、K598、R728、F753、L754、N787 和 D944)的 PRSV-LM 全长 cDNA 克隆突变体:pGprsvm2、pGprsvm4、pGprsvm6和pGprsvm8。并在强毒株pPRSV-LM的HC-Pro和CP基因之间插入gfp基因,构建含gfp基因的强毒株pPRSV-LM-GFP/CP。构建的5种PRSV-LM全长cDNA克隆经人工接种、病症观察和RT-PCR检测...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图133个马铃挤Y病毒属病毒在8个候选突变位点的氮签成序列比对圈

毒：８个候选位点在ＰＲＳＶ－ＬＭ上对应的氨基酸位点为第３０９位异寫氨酸（Ｉ）、第４８１位赖??氨酸（Ｋ）、第５９８位赖氨酸（Ｋ）、第７２８位精氨酸（Ｒ）、第７５３位苯丙氨酸（Ｆ）、第乃４??位亮氨酸（Ｌ）、第７８７位天冬醜胺（Ｎ）、第９４４位天冬氨酸（Ｄ）；弱毒株；夏威夷ＰＲＳＶ....

图2构建亚克隆pMD-MI-3,pMD-M4-6和pMD-MI-6的PCR扩增电泳图

Ｍｌ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００；?Ｍ２：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００??Ｆｉｇ?２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?化６?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ａｐｐｌｉｅｄ?化?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｃｏｎｓ化ｕｃｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｐＭＤ－ＩＶｎ－３，??ｐＭＤ－Ｍ....

图９强巧株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ间巧２０天攻巧后的症状图??保护病毒与攻击病寿接种的间隔时间为２０天

Ｈ组弱毒突变体ｐＧｐｒｓｖｍ４、ｐＧｐｒｓｖｍ６和ｐＧｐｒｓｖｍＳ分别保护接种非转基因番??木瓜苗２０天后，用强毒株ｐＰ民ＳＶ－ＬＭ二次接种，进斤攻毒。非转基因番木瓜苗攻??毒后０天、１４天、２１天、３０天、５０天的症状表现见图９，攻毒后的番木瓜苗均有??较轻微的叶片黄化发生，接....

图１３强毒株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ间巧１０天攻毒后的症状图??ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ在保护接种后１０天进行攻毒

两组弱毒突变体ｐＧｐｒｓｖｍ６和ｐＧｐｒｓｖｍＳ分别接种非转基因番木瓜苗１０天后，??用强毒株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ二次接种，进行攻毒。两个实验组在攻毒后０天、１４??天、２１天、３０天、５０天的症状表现见图１３，在两个实验组的整个攻毒过程中，后??期均发生了轻微的叶片黄....

本文编号：4019789