两种腐霉菌LAMP检测方法的建立与大豆疫霉菌RxLR效应子中无序结构域的功能研究

发布时间：2025-04-01 03:52

　　卵菌纲隶属于鞭毛菌亚门,分为4个目(水霉目、霜霉目、链壶菌目、水节霉目),其中霜霉目的腐霉菌、疫霉菌、霜霉菌等均是引起植物病害的主要致病菌。腐霉菌已知有120余种,大多数是腐生性植物病原菌,主要通过土壤传播并具有广泛的宿主范围。它们通常侵染幼苗的根和种子,并引起苗期前后的猝倒,种子腐烂,根腐和果实腐烂等症状,造成严重的农业经济损失。瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)能引物多种农作物的猝倒病和果实、根部腐烂病,寄主范围很广,可以侵染玉米引起茎腐,侵染黄瓜、番茄等引起猝倒病、果腐,在苗期发病尤为严重,常造成大量死苗。终极腐霉(Pythiumultimum)是一种常见的土传病原菌也是最有致病力的腐霉属之一,终极腐霉能侵染大量的经济作物,包括小麦、玉米、大豆、马铃薯、番茄等。目前腐霉的分子检测方法有普通PCR、Real-timePCR检测技术均需要昂贵的仪器,检测成本高,不利于在基层大范围推广。而环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新开发的分子检测技术,其以强特异性、高灵敏度、快速性和低检测成本的优势,...

【文章页数】：110 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
绪论
上篇 文献综述
    第一章 植物病原真菌和卵菌的分子检测技术研究进展
        1. 病原真菌分子检测技术
            1.1 普通PCR分子检测技术
            1.2 多重PCR分子检测技术
            1.3 Real-time PCR分子检测技术
            1.4 环介导等温扩增(LAMP)分子检测技术
            1.5 胶体金分子检测技术
            1.6 高通量检测技术
        2. 植物病原真菌检测技术现存问题与应用前景
    第二章 环介导等温扩增技术的研究进展
        1. 环介导等温扩增技术引物设计和反应原理
            1.1 LAMP技术引物设计原理
            1.2 LAMP反应原理
        2. LAMP技术的检测方法及优缺点
        3. 环介导等温扩增技术在植物病原微生物检测中的应用
            3.1 细菌的检测
            3.2 真菌的检测
            3.3 病毒的检测
            3.4 线虫的检测
        4. 展望
    第三章 卵菌RxLR效应子研究进展及无序蛋白的特征与生物学功能
        1. 卵菌RxLR效应子研究进展
        2. 无序蛋白的特征与生物学功能
下篇 研究内容
    第一章 瓜果腐霉菌环介导等温扩增技术的研究
        1 材料与方法
            1.1 供试菌株
            1.2 试剂与仪器
            1.3 基因组DNA提取
            1.4 瓜果腐霉菌的鉴定
            1.5 瓜果腐霉靶标基因筛选与引物设计
            1.6 瓜果腐霉LAMP反应体系及条件的优化
            1.7 瓜果腐霉LAMP特异性检测
            1.8 灵敏度检测
            1.9 人工接种瓜果腐霉并对植株的发病组织检测
        2 结果与分析
            2.1 鉴定瓜果腐霉的ITS序列的引物设计
            2.2 鉴定瓜果腐霉的序列比对结果
            2.3 瓜果腐霉靶标基因的筛选和LAMP特异性引物
            2.4 LAMP反应体系的优化
            2.5 LAMP检测方法的特异性
            2.6 LAMP检测方法的灵敏度
            2.7 LAMP方法在发病植株中的检测
        3 讨论
    第二章 终极腐霉菌环介导等温扩增技术的研究
        1. 材料和方法
            1.1 供试菌株
            1.2 实验所需试剂、仪器
            1.3 基因组DNA提取
            1.4 终极腐霉菌的鉴定
            1.5 终极腐霉靶标基因筛选与引物设计
            1.6 可视化的终极腐霉LAMP反应体系的建立
            1.7 终极腐霉LAMP引物特异性评估实验
            1.8 终极腐霉LAMP引物灵敏度评估实验
            1.9 终极腐霉菌侵染寄主实验
        2. 结果
            2.1 鉴定终极腐霉腐霉的ITS序列的引物设计
            2.2 鉴定终极腐霉的序列比对结果
            2.3 终极腐霉LAMP靶标基因的筛选和引物序列
            2.4 LAMP检测方法的特异性
            2.5 终极腐霉LAMP引物灵敏度评估实验
            2.6 LAMP方法在发病植株中的检测
        3. 讨论
    第三章 大豆疫霉菌RxLR效应子中无序结构的功能研究
        1. 材料和方法
            1.1 序列来源
            1.2 无序蛋白结构预测
            1.3 氨基酸组成分析
            1.4 农杆菌转化
        2. 结果与分析
            2.1 RxLR蛋白含有大量的无序结构
            2.2 RxLR效应子富含长片段的无序结构区段
            2.3 氨基酸组成特异性
            2.4 RxLR-dEER区富含无序结构
            2.5 无序结构在W/Y/L元件分布少
            2.6 α-MoRFs广泛分布在RxLR蛋白C端区
            2.7 无序结构影响效应分子诱导细胞死亡活性
        3. 讨论
本论文结论和创新点
附录
参考文献
致谢
攻读学位期间取得的学术成果目录



本文编号：4038900