皱叶留兰香快速繁殖技术及挥发油GC-MS分析

发布时间：2020-05-08 02:25

【摘要】：皱叶留兰香(Mentha crispata)为唇形科薄荷属多年生宿根性草本植物,植株体内含有酯类、醇类、醛类、酮类等挥发性芳香物质,留兰香提取精油可广泛应用于医药、食品生产、日用化工等方面具有广泛的应用价值,市场前景良好。本文以茎段扦插繁殖、腋芽繁殖、愈伤组织分化三种快速繁殖方式建立了皱叶留兰香再生体系,并利用GC-MS技术对皱叶留兰香栽培苗与愈伤组培苗挥发油化学组分进行分析。旨为皱叶留兰香的种植、开发与利用提供理论依据与技术支撑,本文获得的主要研究结果如下:1.茎段繁殖:以皱叶留兰香茎段进行扦插繁殖,结果表明:采用50mg/LNAA处理30min对茎段扦插生根率可达100%。2.腋芽繁殖:以皱叶留兰香茎段为外植体进行不同方式的灭菌处理。实验结果表明:最佳外植体灭菌方法为:先用0.5%洗衣粉溶液浸泡5min,然后流水下冲洗1～2h,再用70%乙醇灭菌30s,然后0.1升汞灭菌8min。采用此灭菌方法效果最好,污染率为25%,发芽率达71.67%。皱叶留兰香腋芽茎段增殖培养基以MS+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L为最适宜培养基配方。芽苗增殖系数达3.1腋芽萌发早,有效芽苗数多且生长健壮,芽苗高度为3.5cm。3.愈伤组织诱导与再生体系建立:皱叶留兰香愈伤组织诱导的最佳外植体为尖端茎段,最佳愈伤诱导培养基为MS+TDZ2mg/L琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L+25%椰汁,愈伤组织诱导率达99.05%,最佳愈伤分化增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L,愈伤分化率为58%。最佳愈伤培养条件为接种后先置于黑暗条件暗培养7d然后再进行光照,培养温度(25±1)℃,光照强度2000～25001x,光照时间16 h/d,黑暗8 h/d,相对湿度70%～80%。4.生根培养与炼苗移栽:皱叶留兰香较易生根,低浓度的激素即可以使皱叶留兰香生根。1/2MS+琼脂7.0g/L+蔗糖20g/L+IBA0.5mg/L为皱叶留兰香生根的最佳培养基。生根率可达100%。炼苗移栽最适宜的移栽基质为细沙土:珍珠岩:腐殖土(2:1:1)。成活率可达99%。5.挥发性精油提取与GC-MS分析:分别以温室培养的皱叶留兰香栽培苗(A)与愈伤组织培养产生的组培苗(B)为实验材料,用水蒸气蒸馏法提取植株内的精油(挥发油)成分,利用行GC-MS气相色谱-质谱分析,其中温室栽培苗(A)提取的挥发油鉴定出25种化学成分,而愈伤组培苗(B)提取的挥发性油鉴定出30种化学成分。两种皱叶留兰香共有的化学成分有19种。最主要的化学成分有香二氢香芹酮、乙酸香芹酮、荜澄茄油萜,β-水芹烯、α-蒎烯、β-月桂烯、β-石竹烯、植物醇、d-柠檬烯等。
【图文】：

３？６月份以或夏季生长状态良好，无病虫害，生长旺盛的皱叶剪取１０？１５ｃｍ枝条顶端茎段，去除下端较大叶片，备用。逡逑条件逡逑基部分别浸泡于ＮＡＡ（１０ｍｇ／Ｌ，５０ｍｇ／Ｌ，１００ｍｇ／Ｌ，１５０ｍｇ／Ｌ浸泡ｌＯｍｉｎ、３０ｍｉｎ、６０ｍｉｎ。之后清水冲洗基部残留溶液，移（２：邋１：邋１）的培养盆中。统计生根率。逡逑分析逡逑表２＿１不同浓度ＮＡＡ对莲段扦插影响逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－１邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＮＡＡ邋ｏｎ邋ｓｔｅｍ邋ｃｕｔｔｉｎｇ逡逑逦时间逦扦插数逦生根数逦生根率ｍｉｎ逦（个）逦（个）逦（％）１０逦３０逦２８逦９３．３３３０逦３０逦３０逦１００６０逦３０逦３０逦１００１０逦３０逦２９逦９６．６８３０逦３０逦３０逦１００５０逦３０逦３０逦１００

６＿ＢＡ邋浓度（ｍｇ／Ｌ）逡逑６￣ＢＡ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ｍｇ／Ｌ）逡逑图３－１不同浓度６－ＢＡ对诱导皱叶留兰香茎段分化的影响逡逑Ｆｉｇ．３－１邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋６－ＢＡ邋ｏｎ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｔｅｍ邋ｓｅｇｍｅｎｔｓ邋ｏｆ邋Ｍｅｎｔｈａ邋ｃｒｉｓｐａｔａ．逡逑培养一周左右，接种的皱叶留兰香茎段基部稍有膨大，，腋芽处开始有侧芽萌发，培逡逑养３５ｄ后，腋芽处有大量的丛生芽产生，但没有根的生成。根据表３－２分析可知，选取逡逑单一激素６－ＢＡ进行培养时，皱叶留兰香的增殖随着６－ＢＡ的浓度增加而增加，当６－ＢＡ逡逑的浓度高达３．０ｍｇ／Ｌ时增殖系数达到了邋４．２０，但是产生的丛生芽植株矮小，节间较短，逡逑叶片细小。６－ＢＡ浓度低于０．２邋ｍｇ／Ｌ时，皱叶留兰香腋芽增值率较低。因此若采用单一逡逑激素６－ＢＡ诱导皱叶留兰香茎段分化时，激素浓度应该控制在０．２？１．０ｍｇ／Ｌ，并且诱导逡逑产生的丛生芽长势好，叶片大浓绿，茎较粗。逡逑?
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S573.9

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本文编号：2653954