蛇足石杉内生真菌的多样性分析及与石杉碱甲含量的关联分析
发布时间：2021-06-05 14:05
蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb.ex Murray）Trev.）是一种多年生药用蕨类植物,生活史漫长而复杂。其体内的生物碱—石杉碱甲（Hup-A）是世界上治疗阿尔兹海默症的重要药物之一。蛇足石杉生长缓慢,且石杉碱甲含量极低,随着巨大的需求压力和持续的采挖,导致蛇足石杉野生资源枯竭,濒临灭绝。已有的研究表明蛇足石杉含有丰富的内生真菌,内生真菌在蛇足石杉的生长发育与石杉碱甲的代谢合成途径中具有重要作用。本研究建立蛇足石杉内生真菌资源库,探究蛇足石杉内生真菌不同组织部位多样性差异、不同月份的菌群动态变化,分析蛇足石内生真菌与石杉碱甲含量之间的关联性,为调控蛇足石杉生长季节中石杉碱甲的生物合成提供依据。本研究的研究内容和结论如下:（1）采集一年中不同月份蛇足石杉的根、茎、叶,从中分离出95株内生真菌。根部分离出19株,茎部分离出43株,叶片分离出33株,茎分离出的内生真菌最多;鉴定到种水平的有64株,鉴定到属水平的有21株,鉴定到科水平的有7株,其余的鉴定到纲水平及以上;67.37%的菌株鉴定到种,22.11%的菌株鉴定到属。其中,镰刀菌属（Fusarium spp.）...
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Hup-A和ZT-1的结构式
西北大学硕士学位论文12图2.1蛇足石杉植株2.1.2实验试剂蒸馏水、75%酒精、0.1%升汞、PDA培养基（粉末）、土豆、硫酸链霉素、氨苄青霉素、石杉碱甲标准品、乙酸铵、色谱甲醇、色谱乙腈等。2.1.3仪器耗材超净工作台、高压灭菌锅、电子分析天平、培养皿、酒精灯、镊子、生化培养箱、多功能摇床、磁珠菌种保存管、电泳槽、凝胶成像仪、PCR仪、细胞超声破碎仪、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪（岛津）等。2.2实验方法与步骤2.2.1样品灭菌处理将新鲜的蛇足石杉的植物，整株在用自来水连续冲洗2-3h，清洗组织表面，直至看不到泥沙等杂质。冲洗干净后，用无菌的滤纸吸干组织表面的水分，使用手术刀将其分割为根段、叶片、茎部三个部分，根和茎分成2cm的小段。将根、茎、叶取出，进行表面灭菌处理。用灭菌的蒸馏水冲洗30s，75%酒精处理2min，然后无菌的蒸馏水冲洗3次，每次处理1min，再将组织块置于0.1%升汞中灭菌处理8min，无菌水冲洗5次，每次2min，后用无菌的滤纸吸干组织表面的水分，灭菌材料备用。
真菌基因组DNA提取流程图
【参考文献】：
期刊论文
[1]宁前胡内生真菌Fusarium tricinctum固体发酵代谢产物研究[J]. 王国凯,刘海涛,刘丛彬,杨家欣,王刚,刘劲松. 热带亚热带植物学报. 2020(02)
[2]西双版纳5种附生兰非菌根内生真菌多样性研究[J]. 冯晓晓,陈家杰,刘峰,胡卫珍,林福呈,章初龙. 菌物学报. 2019(11)
[3]3种有毒赤潮微藻对海岸底泥微生物群落多样性的影响[J]. 刘仁沿,宋珊珊,宫常宝,李冬梅,刘磊,梁玉波,隋世峰. 应用与环境生物学报. 2020(02)
[4]海南广藿香内生真菌分离鉴定及拮抗菌株筛选[J]. 易天凤,吴友根,于靖,张军锋,杨东梅. 热带作物学报. 2019(08)
[5]山豆根内生真菌的分离与鉴定[J]. 纳秋霞,舒燕,张毅,蔡乐,赵景云,宋娜丽. 中国现代医生. 2019(21)
[6]蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及其代谢产物乙酰胆碱酯酶抑制活性及抗炎活性研究[J]. 齐博文,莫婷,张鑫,闫雅如,徐溪平,杨洪芸,王晓晖,李军,史社坡,刘晓. 中国中药杂志. 2019(15)
[7]川芎内生真菌Cladosporium sp.次级代谢产物及抗菌活性研究[J]. 马川,蒙春旺,彭成,熊亮,周勤梅. 天然产物研究与开发. 2019(01)
[8]海洋红树林植物卤蕨内生真菌Cladosporium perangustum MA-318中一个新的链烯酸酐衍生物methylate cordyanhydride A[J]. 李衍荷,李晓明,徐蕊,李洪雷,王斌贵. 海洋科学. 2017(09)
[9]蛇足石杉中产石杉碱甲内生真菌的分离和鉴定[J]. 韩文霞,李伟泽,李小峰,张寒,杨时珍,杜江凤,景欢,程传彬. 微生物学通报. 2017(09)
[10]药用植物蛇足石杉内生菌研究进展[J]. 唐承晨,张纯,王吉永,王莉莉,胡之璧,黎万奎. 江苏农业科学. 2017(07)
博士论文
[1]南方红豆杉内生真菌多样性、次生代谢产物及其与宿主的相关性研究[D]. 吴令上.第二军医大学 2012
[2]蛇足石杉内生真菌的促寄主生长作用及发酵产物研究[D]. 李娜.江苏大学 2007
硕士论文
[1]酸枣仁总皂苷的肠道菌群体外代谢转化研究[D]. 崔小芳.山西中医药大学 2020
[2]蛇足石杉内生真菌多样性及生物活性研究[D]. 崔灵利.华中农业大学 2019
[3]蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及菌株Cercospora lagenariae化学成分研究[D]. 张鑫.北京中医药大学 2018
[4]蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14中LDC和CAO基因的克隆及表达[D]. 彭思露.江西师范大学 2016
[5]蛇足石杉的离体培养及内生真菌的分离与鉴定[D]. 刘江海.中南林业科技大学 2016
[6]药用植物红豆杉和蛇足石杉内生真菌多样性及其生物活性产物的研究[D]. 杨迎迎.华东理工大学 2013
[7]石杉属植物内生菌的多样性及其次生代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性研究[D]. 徐海杰.华中农业大学 2013
[8]产石杉碱甲蛇足石杉内生菌的筛选和鉴定[D]. 徐晓苗.华中农业大学 2011
[9]产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定[D]. 汪涯.江西师范大学 2011
[10]福建蛇足石杉内生真菌的分离鉴定与石杉碱甲的HPLC检测[D]. 谢丹凤.福建农林大学 2009
本文编号：3212304
【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校
【文章页数】：115 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Hup-A和ZT-1的结构式
西北大学硕士学位论文12图2.1蛇足石杉植株2.1.2实验试剂蒸馏水、75%酒精、0.1%升汞、PDA培养基（粉末）、土豆、硫酸链霉素、氨苄青霉素、石杉碱甲标准品、乙酸铵、色谱甲醇、色谱乙腈等。2.1.3仪器耗材超净工作台、高压灭菌锅、电子分析天平、培养皿、酒精灯、镊子、生化培养箱、多功能摇床、磁珠菌种保存管、电泳槽、凝胶成像仪、PCR仪、细胞超声破碎仪、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪（岛津）等。2.2实验方法与步骤2.2.1样品灭菌处理将新鲜的蛇足石杉的植物，整株在用自来水连续冲洗2-3h，清洗组织表面，直至看不到泥沙等杂质。冲洗干净后，用无菌的滤纸吸干组织表面的水分，使用手术刀将其分割为根段、叶片、茎部三个部分，根和茎分成2cm的小段。将根、茎、叶取出，进行表面灭菌处理。用灭菌的蒸馏水冲洗30s，75%酒精处理2min，然后无菌的蒸馏水冲洗3次，每次处理1min，再将组织块置于0.1%升汞中灭菌处理8min，无菌水冲洗5次，每次2min，后用无菌的滤纸吸干组织表面的水分，灭菌材料备用。
真菌基因组DNA提取流程图
【参考文献】：
期刊论文
[1]宁前胡内生真菌Fusarium tricinctum固体发酵代谢产物研究[J]. 王国凯,刘海涛,刘丛彬,杨家欣,王刚,刘劲松. 热带亚热带植物学报. 2020(02)
[2]西双版纳5种附生兰非菌根内生真菌多样性研究[J]. 冯晓晓,陈家杰,刘峰,胡卫珍,林福呈,章初龙. 菌物学报. 2019(11)
[3]3种有毒赤潮微藻对海岸底泥微生物群落多样性的影响[J]. 刘仁沿,宋珊珊,宫常宝,李冬梅,刘磊,梁玉波,隋世峰. 应用与环境生物学报. 2020(02)
[4]海南广藿香内生真菌分离鉴定及拮抗菌株筛选[J]. 易天凤,吴友根,于靖,张军锋,杨东梅. 热带作物学报. 2019(08)
[5]山豆根内生真菌的分离与鉴定[J]. 纳秋霞,舒燕,张毅,蔡乐,赵景云,宋娜丽. 中国现代医生. 2019(21)
[6]蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及其代谢产物乙酰胆碱酯酶抑制活性及抗炎活性研究[J]. 齐博文,莫婷,张鑫,闫雅如,徐溪平,杨洪芸,王晓晖,李军,史社坡,刘晓. 中国中药杂志. 2019(15)
[7]川芎内生真菌Cladosporium sp.次级代谢产物及抗菌活性研究[J]. 马川,蒙春旺,彭成,熊亮,周勤梅. 天然产物研究与开发. 2019(01)
[8]海洋红树林植物卤蕨内生真菌Cladosporium perangustum MA-318中一个新的链烯酸酐衍生物methylate cordyanhydride A[J]. 李衍荷,李晓明,徐蕊,李洪雷,王斌贵. 海洋科学. 2017(09)
[9]蛇足石杉中产石杉碱甲内生真菌的分离和鉴定[J]. 韩文霞,李伟泽,李小峰,张寒,杨时珍,杜江凤,景欢,程传彬. 微生物学通报. 2017(09)
[10]药用植物蛇足石杉内生菌研究进展[J]. 唐承晨,张纯,王吉永,王莉莉,胡之璧,黎万奎. 江苏农业科学. 2017(07)
博士论文
[1]南方红豆杉内生真菌多样性、次生代谢产物及其与宿主的相关性研究[D]. 吴令上.第二军医大学 2012
[2]蛇足石杉内生真菌的促寄主生长作用及发酵产物研究[D]. 李娜.江苏大学 2007
硕士论文
[1]酸枣仁总皂苷的肠道菌群体外代谢转化研究[D]. 崔小芳.山西中医药大学 2020
[2]蛇足石杉内生真菌多样性及生物活性研究[D]. 崔灵利.华中农业大学 2019
[3]蛇足石杉内生真菌的分离鉴定及菌株Cercospora lagenariae化学成分研究[D]. 张鑫.北京中医药大学 2018
[4]蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14中LDC和CAO基因的克隆及表达[D]. 彭思露.江西师范大学 2016
[5]蛇足石杉的离体培养及内生真菌的分离与鉴定[D]. 刘江海.中南林业科技大学 2016
[6]药用植物红豆杉和蛇足石杉内生真菌多样性及其生物活性产物的研究[D]. 杨迎迎.华东理工大学 2013
[7]石杉属植物内生菌的多样性及其次生代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性研究[D]. 徐海杰.华中农业大学 2013
[8]产石杉碱甲蛇足石杉内生菌的筛选和鉴定[D]. 徐晓苗.华中农业大学 2011
[9]产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离与鉴定[D]. 汪涯.江西师范大学 2011
[10]福建蛇足石杉内生真菌的分离鉴定与石杉碱甲的HPLC检测[D]. 谢丹凤.福建农林大学 2009
本文编号：3212304
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