红、黄、绿荧光蛋白标记根瘤菌的构建
发布时间：2021-06-30 19:16
要研究根瘤菌与土著菌的竞争及消长关系,或明确某一特定根瘤菌的占瘤率和结瘤率等,只有借助于标记技术使目的菌具有示踪特性,方能检测,方便研究。为获得红色荧光蛋白质粒RFP（Red flouoresent protein）、黄色荧光蛋白质粒YFP（Yellow flouoresent protein）和绿色荧光蛋白质粒GFP（Green flouoresent protein）能够稳定表达和传代的根瘤菌标记菌株,本研究采用以滤膜为载体的经典三亲本杂交方法,将不同颜色荧光蛋白RFP、YFP和GFP质粒,成功导入辅助菌大肠杆菌中,以此为基础进行构建和稳定性验证,并通过对荧光标记菌分别接种于紫花苜蓿甘农5号（Medicagosativa cv.Gannong No.5）和紫花苜蓿S.343（Medicagosativa cv.S.343）中,测定接种苜蓿幼苗的地上及地下部鲜重、干重,以及根长、株高、叶片数、叶面积、单株结瘤数、固氮酶活性、根瘤等级、占瘤率和叶片叶绿素含量等生长及生理指标,测试接种三种荧光标记菌及其出发菌对苜蓿幼苗产生的影响,取得以下结果:1、众多研究结果表明热激转化可以用于质粒蛋白...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
红、黄、绿三种颜色蛋白质粒热激转化培养的单菌落Fig.1Red、yellowandgreenthreecolorsplasmidheatshockproteintransductionofsinglecolony
甘肃农业大学 2017 届硕士学位论文表 2-2 不同温度下红、黄、绿三种蛋白质粒 PCR 鉴定Fig.2-2 Identification of three kinds of plasmid protein PCR of red, yellow andgreen at different temperatures"+"指 PCR 鉴定清楚看见明显很亮的单一条带，"-"表示 PCR 鉴定不能看见明显很亮的单一条带。:"+" Refers to the PCR identification see obviously very bright single band, and"-"showed the PCR identification can'tlearly very bright single band.色不同温度菌液 PCR 鉴定情况1 2 3 4 5 6 7 850℃52℃54℃56℃58℃60℃62℃64℃色质粒 + + + _ _ _ _ /色质粒 + _ _ _ _ _ _ /色质粒 + + + + + + + +
TGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAAAGGCCTGCAGCAAACGACGAAAACTACGCTGCAGGAGCTTAA2.3.4 红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒转导的稳定性三种不同颜色蛋白质粒均用荧光显微镜压片单菌落，观察有无荧光，均能明显的看到红色、黄色和绿色的荧光(表 2-3)，如图 3 所示，表明红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒已被成功导入大肠杆菌中，并均能稳定表达。表 2-3 红、黄、绿三种蛋白质粒荧光显微镜下不同荧光情况Fig.3 Fluorescence spectra of three plasmid proteins of red, yellow and green underdifferent fluorescence conditions："+"指荧光显微镜下可以看到明显的有颜色荧光，"-"表示荧光显微镜下不能看到明显的有颜色荧光。ote: "+" means the fluorescent microscope can see clear color fluorescent, "-" said fluorescence microscope can't see clearly the colorf fluorescence.颜色 红色蛋白质粒 黄色蛋白质粒 绿色蛋白质粒荧光显微镜观察荧光情况 + + +
【参考文献】：
期刊论文
[1]热激转录因子调控植物逆境响应研究进展[J]. 田尉婧,殷学仁,李鲜,陈昆松. 园艺学报. 2017(01)
[2]玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的RNA干扰载体的构建%[J]. 韩颖,赵寿经,杨瑜,孙尧,王乐. 华南理工大学学报(自然科学版). 2016(03)
[3]高分子量腈水合酶在大肠杆菌中的表达策略及重组菌的细胞催化[J]. 张晓欢,崔文璟,周哲敏. 微生物学通报. 2016(10)
[4]致病性大肠杆菌绿色荧光蛋白标记[J]. 郭永明,陈晓丽,余晶,杨晓红,杨健. 川北医学院学报. 2015(05)
[5]基于杨木发酵产异丁醇大肠杆菌工程菌构建[J]. 王启业,王义强,田宇,彭牡丹,陈章靖,陆利. 林业科学. 2015(07)
[6]花生热激蛋白AhHSP70与热激因子AhHSF基因的克隆及表达分析[J]. 李翠,侯蕾,任丽,张烨,郑奕雄,王兴军. 山东农业科学. 2015(04)
[7]环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究[J]. 孙金钰,郑屹峰,巫启明,郭建辉,林春通,刘树滔,饶平凡. 福州大学学报(自然科学版). 2014(05)
[8]接种荧光标记根瘤菌对苜蓿幼苗生长的影响[J]. 陈力玉,张淑卿,李剑峰,师尚礼,霍平慧,苗阳阳. 草原与草坪. 2013(06)
[9]植物耐热性及热激信号转导机制研究进展[J]. 陈思婷,郭房庆. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[10]大肠杆菌热激反应研究及其在重组蛋白表达中的应用[J]. 乐易林. 微生物学通报. 2013(11)
博士论文
[1]根瘤菌在苜蓿植株体内的运移及影响因素[D]. 张淑卿.甘肃农业大学 2012
[2]四株海洋放线菌遗传转化体系的研究[D]. 侯艳华.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2006
硕士论文
[1]大麦成熟胚离体培养条件的优化及HgNHX1基因表达载体的构建和遗传转化[D]. 马玲珑.甘肃农业大学 2015
本文编号：3258329
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
红、黄、绿三种颜色蛋白质粒热激转化培养的单菌落Fig.1Red、yellowandgreenthreecolorsplasmidheatshockproteintransductionofsinglecolony
甘肃农业大学 2017 届硕士学位论文表 2-2 不同温度下红、黄、绿三种蛋白质粒 PCR 鉴定Fig.2-2 Identification of three kinds of plasmid protein PCR of red, yellow andgreen at different temperatures"+"指 PCR 鉴定清楚看见明显很亮的单一条带，"-"表示 PCR 鉴定不能看见明显很亮的单一条带。:"+" Refers to the PCR identification see obviously very bright single band, and"-"showed the PCR identification can'tlearly very bright single band.色不同温度菌液 PCR 鉴定情况1 2 3 4 5 6 7 850℃52℃54℃56℃58℃60℃62℃64℃色质粒 + + + _ _ _ _ /色质粒 + _ _ _ _ _ _ /色质粒 + + + + + + + +
TGAGTTTGTAACAGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAAAGGCCTGCAGCAAACGACGAAAACTACGCTGCAGGAGCTTAA2.3.4 红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒转导的稳定性三种不同颜色蛋白质粒均用荧光显微镜压片单菌落，观察有无荧光，均能明显的看到红色、黄色和绿色的荧光(表 2-3)，如图 3 所示，表明红、黄、绿三种不同颜色蛋白质粒已被成功导入大肠杆菌中，并均能稳定表达。表 2-3 红、黄、绿三种蛋白质粒荧光显微镜下不同荧光情况Fig.3 Fluorescence spectra of three plasmid proteins of red, yellow and green underdifferent fluorescence conditions："+"指荧光显微镜下可以看到明显的有颜色荧光，"-"表示荧光显微镜下不能看到明显的有颜色荧光。ote: "+" means the fluorescent microscope can see clear color fluorescent, "-" said fluorescence microscope can't see clearly the colorf fluorescence.颜色 红色蛋白质粒 黄色蛋白质粒 绿色蛋白质粒荧光显微镜观察荧光情况 + + +
【参考文献】：
期刊论文
[1]热激转录因子调控植物逆境响应研究进展[J]. 田尉婧,殷学仁,李鲜,陈昆松. 园艺学报. 2017(01)
[2]玉米陈化关键酶基因Zmlox-2的RNA干扰载体的构建%[J]. 韩颖,赵寿经,杨瑜,孙尧,王乐. 华南理工大学学报(自然科学版). 2016(03)
[3]高分子量腈水合酶在大肠杆菌中的表达策略及重组菌的细胞催化[J]. 张晓欢,崔文璟,周哲敏. 微生物学通报. 2016(10)
[4]致病性大肠杆菌绿色荧光蛋白标记[J]. 郭永明,陈晓丽,余晶,杨晓红,杨健. 川北医学院学报. 2015(05)
[5]基于杨木发酵产异丁醇大肠杆菌工程菌构建[J]. 王启业,王义强,田宇,彭牡丹,陈章靖,陆利. 林业科学. 2015(07)
[6]花生热激蛋白AhHSP70与热激因子AhHSF基因的克隆及表达分析[J]. 李翠,侯蕾,任丽,张烨,郑奕雄,王兴军. 山东农业科学. 2015(04)
[7]环状排列黄色荧光蛋白在大肠杆菌及毕赤酵母中表达的比较研究[J]. 孙金钰,郑屹峰,巫启明,郭建辉,林春通,刘树滔,饶平凡. 福州大学学报(自然科学版). 2014(05)
[8]接种荧光标记根瘤菌对苜蓿幼苗生长的影响[J]. 陈力玉,张淑卿,李剑峰,师尚礼,霍平慧,苗阳阳. 草原与草坪. 2013(06)
[9]植物耐热性及热激信号转导机制研究进展[J]. 陈思婷,郭房庆. 中国科学:生命科学. 2013(12)
[10]大肠杆菌热激反应研究及其在重组蛋白表达中的应用[J]. 乐易林. 微生物学通报. 2013(11)
博士论文
[1]根瘤菌在苜蓿植株体内的运移及影响因素[D]. 张淑卿.甘肃农业大学 2012
[2]四株海洋放线菌遗传转化体系的研究[D]. 侯艳华.中国科学院研究生院（海洋研究所） 2006
硕士论文
[1]大麦成熟胚离体培养条件的优化及HgNHX1基因表达载体的构建和遗传转化[D]. 马玲珑.甘肃农业大学 2015
本文编号：3258329
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