AtHDG11和ZmCBL4转基因玉米田间抗逆性鉴定

发布时间：2021-07-02 23:43

　　玉米是一种最重要的禾本科作物,它能够为全世界提供粮食、饲料及生物能源。但在玉米的生长发育过程中,会受到各种各样的逆境胁迫,其中以干旱和盐碱胁迫最为严重,最终影响玉米的产量。利用传统育种的方法已经获得一些抗旱或者耐盐的玉米新品种,但是传统育种的方法比较耗时、耗力和耗钱。随着生物技术的迅速发展,利用转基因方法获得抗旱或者耐盐的玉米品种成为了一种可能。拟南芥的AtHDG11（HOMEODOMAIN GLABROUS11/ENHANCED DROUGHT TOLERANCE1）基因共10个外显子,编码723个氨基酸。该基因编码着一个同源异形框-亮氨酸拉链类蛋白质,属于HD-ZIP IV亚家族。前人已经证明该基因能够显著提高拟南芥、烟草、牛尾草、水稻、棉花和小麦的耐旱性。本研究中,将该基因通过农杆菌介导的方法转入到玉米优良自交系Z31中,并以郑58为轮回亲本进行多代回交,得到BC₄F₄的材料;经田间干旱实验得出:在干旱处理条件下雌雄穗开花间隔期（Anthesis-silking interval）并没有发生显著的变化;但是HS273、HS253、HS9... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

载体pCB2006-AtHDG11的示意图

干旱处理：花期控水，即开花前 15 天开始进行控水处理直至花期结束；正常处理：花期正常浇水。最后分别统计结穗率、单穗粒重、百粒重、水分。结穗率%=每个重复结穗的株数/每个重复的总株数×100 （注：10 粒以上的单穗算结实，10粒以下的算没有结实）单穗粒重=每个重复的总粒重（g）/每个重复的总株数，最后根据水分矫正到 14%的重量百粒重：随机数 100 粒种子的总重，每个重复数三次的平均数水分：谷物水分测量仪（PM-8188-A）测量2.2 结果与分析2.2.1 转 AtHDG11 基因玉米的 PCR 鉴定由本实验室前期获得了9个独立的转基因事件，并且已经与郑58回交到了BC2F1代。对BC2F1代的每个转基因幼苗及其后代进行目的基因的检测（图 2.1）。结果表明，每个转基因事件都扩增到了 496 bp 的 DNA 片段，并且该片段的长度与含有目的基因的表达载体 pCU2006-AtHDG11 扩增的产物大小一致。而 AtHDG11 为拟南芥的基因，并且在玉米种没有发现其同源基因。该图的结果与其一致，也没有从对照郑 58 中扩增出 AtHDG11 基因。初步证明，AtHDG11 基因已经成功地整合到了玉米的基因组中。

院硕士学位论文 第二章 转 AtHDG11 基因玉米 AtHDG11 基因玉米植株中 AtHDG11 基因转录水平的分转基因事件和对照郑 58 各取 30 株叶片混合磨样，提取总 RNA，并反转录 为模板，以 AtHDG11 基因的特异性序列为引物，以玉米的 α-tubulin 基因株的阳性苗进行RT-PCR和qPCR，来检测各个事件中目的基因在转录水平的图 2.2 和图 2.3），每个转基因事件都有该基因的表达，并且表达量各不相表达量相对增加 50-250 倍之多，而且对照郑 58 中并没有检测到目的基因AtHDG11 基因已经成功地整合到了玉米的基因组中，并且在玉米基因组中1 2 3 4 5 6 7 8 9 10


本文编号：3261409