过表达蓖麻RcWRI1提高烟叶油脂积累
发布时间：2021-07-04 06:37
植物转录因子WRINKLED1（WRI1）属于AP2/EREBP类转录因子成员,参与调控糖酵解及质体内脂肪酸从头合成相关基因的表达,是植物种子油脂合成积累的重要调节者。迄今,已从模式植物拟南芥、玉米、亚麻荠和油菜等普通油料作物发育种子克隆到编码转录因子WRI1的基因序列并做功能分析。蓖麻（RicinuscommunisL.）是重要工业油料作物,种子含油量高达60%,油脂主要积累在胚乳细胞,油脂中90%是功能独特的蓖麻酸。有关蓖麻转录因子WRI1种类、功能及调控活性的研究还未见报道。为解析蓖麻种子高水平合成积累油脂的机制,并鉴定获得具有高效调控活性的WRI1以用于在植物营养器官组装油脂富集代谢途径,本研究从蓖麻发育种子分离编码RcWRI1转录因子的cDNA克隆,分析RcWRI1基因结构及时空表达特性,构建RcWRI1超表达载体,对普通烟草进行遗传转化并鉴定转基因株系油脂组成等表型,系统分析RcWRI1的功能和应用于植物油脂代谢工程的价值。主要研究结果如下:1.以拟南芥编码AtWRI1的CDs序列为探针,对蓖麻基因组数据库进行BLAST分析显示,RcWRI1基因（LOC8283400）有两...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
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停粒簦祝遥桑矗?约袄醋圆煌?镏值钠渌?祝遥赏?崳?源蛋白构建系统发育树。系统发育分析显示，相比于其他三种拟南芥ＷＲＩ蛋白，ＲｃＷＲＩｌ－Ａ??和ＲｃＷＲＩｌ－Ｂ与ＡｔＷＲＩｌ最接近（图２－４），它们落入与ＡｔＷＲＩｌ和ＢｎＷＲＩｌ相同的进化??枝中。研究表明，ＡｔＷＲＩｌ是拟南芥ＷＲＩ家族成员中唯一一个负责调控种子中ＴＡＧ积累??的转录因子。??２．３．５鹿麻不同组织ＲＮＡ提取质量的检测??提取蓖麻不同组织总ＲＮＡ，将提取ＲＮＡ样品进行琼脂糖凝胶（１％）电泳检测。采用??Ｍａｒｋｅｒ?Ｄ２０００?（Ｇｅｎｓｔａｒ），上样量５?ｐＬ，ＲＮＡ样品的上样量均为５?｜ｉＬ。通过Ｂｉｏ－ｒａｄ凝胶??成像系统观察琼脂糖凝胶电泳图（图２－５）。电泳图显示提取的ＲＮＡ样品电泳条带完好，??１８Ｓ和２８Ｓ电泳条带清晰明亮。用核酸浓度测定仪（Ｂｉｏ－ｒａｄ）检测ＲＮＡ的浓度及纯度，??蓖麻花、叶、果实、果皮ＲＮＡ样品ＯＤ２６ｇ／ＯＤ２８Ｃ分别为２．０、］．９６、１．９１、２．０１。从这些检??测结果来看，这些提取的ＲＮＡ纯度符合要求，可用来做后续试验。??果实果皮叶?花Ｍａｋｅｒ??Ｂ２０００ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??图２－５蓖麻各个组织ＲＮＡ１％琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｖａｒｉｏｕｓ?ｏｒｇａｎｓ?ｏｆ?ｃａｓｔｏｒ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｏｎ?１％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌｓ??２．３．６?和／＾＿／厂５不同组织的表达分析??我们设计乂和的特异性引物，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ检测了和??此呢／八５在蓖麻不同组织器官中的表达情况。结果显示（图２－６）
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓖麻RcWRI1的鉴定及表达分析[J]. 吉夏洁,郝青婷,刘宝玲,薛金爱,李润植. 山西农业大学学报(自然科学版). 2017(04)
[2]植物WRI1基因生物信息学分析[J]. 杨先友,黄春颖,吴建峰,黄有军,张启香. 分子植物育种. 2016(05)
[3]葡萄糖基氟虫腈处理下蓖麻内参基因的稳定性分析[J]. 毛根林,解云,赵俊龙,陈炎,徐汉虹,林菲. 华南农业大学学报. 2016(01)
[4]新型工业油料作物亚麻荠:从基因组到代谢工程[J]. 苑丽霞,毛雪,高昌勇,张莉,薛金爱,李润植. 植物生理学报. 2015(08)
[5]大豆GmWRI1a基因克隆及生物信息学分析[J]. 王志坤,常健敏,李丹丹,李文滨. 东北农业大学学报. 2013(07)
[6]棉花中一个新型转录因子GhWRI1的表达特征与功能分析[J]. 李鑫,王正明,薛伟,初明光. 生物技术通报. 2013(06)
[7]酿酒酵母脂酰-△9脱氢酶亚细胞定位表达及其对烟草脂肪酸合成的影响[J]. 薛金爱,毛雪,吴永美,杨致荣,贾小云,张莉,王计平,岳爱琴,孙希平,李润植. 生物工程学报. 2013(05)
[8]植物AP2/ERF类转录因子研究进展[J]. 张计育,王庆菊,郭忠仁. 遗传. 2012(07)
[9]植物含油量相关转录因子WRINKLED1的研究进展[J]. 黄胜和,丁永红,李东明,陈春香,钟小菊,饶泽昌. 生命科学. 2012(03)
[10]花生种子发育过程中脂肪酸积累规律的研究[J]. 李兰,彭振英,陈高,王莹莹,张斌,毕玉平. 华北农学报. 2012(01)
博士论文
[1]高产油小球藻基因组测序和蛋白质组学研究[D]. 高春芳.清华大学 2012
[2]真核基因剪接机制相关特征研究[D]. 李稚锋.国防科学技术大学 2006
硕士论文
[1]转运肽引导酵母酰基-Δ9脱氢酶质体定位促进烟叶组织合成积累棕榈油酸的研究[D]. 李芳.山西农业大学 2016
[2]大豆二酰甘油酰基转移酶基因（GmDGAT1A）的表达与功能分析[D]. 高秀清.山西农业大学 2016
[3]紫苏种子油脂代谢及限速酶DGAT1基因的表达分析[D]. 张玲慧.山西农业大学 2014
[4]油莎豆WRI1与APS基因克隆及过表达/RNA干扰载体构建[D]. 程超.湖北大学 2014
[5]甘蓝型油菜WRI1基因的克隆与功能分析[D]. 施春霖.湖南农业大学 2013
[6]拟南芥甘油-3-磷酸酰基转移酶的三个基因（GPAT6，7，9）在种子油脂合成及幼苗耐盐中的作用[D]. 郝静芳.南京农业大学 2013
[7]玉米苗期干旱胁迫下可变剪接及其调控因子的研究[D]. 李娇.郑州大学 2013
[8]油酸脱氢酶活性与油菜种子油酸含量的关系研究[D]. 解毅.湖南农业大学 2012
本文编号：3264245
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－ｌ价腳／／Ｊ和心沙７？／／－万的基因结构图??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｔｈｅｅｎｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｓｌｉｃｅ?ｆｏｒｍｓ?ＲｃＷＲＩｌ－Ａ?ａｎｄ?ＲｃＷＲＩｌ－Ｂ??
?ＣｅＷＲＨ??Ｗ??图２－４?ＲｃＷＲＩｌｓ和来自其他物种的ＷＲｌｌ同源物的系统发育分析??Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?ＲｃＷＲＩ?Ｉｓ?ａｎｄ?ＷＲＩ?１?ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ｆｒｏｍ?ｏｔｈｅｒ?ｐｌａｎｔ?ｓｐｅｃｉｅｓ??ＢｎＷＲＩｌ?（ＡＤ０１６３４６）?，?ＺｍＷＲＩｌ－Ａ?（ＡＣＧ３２３６７．１）?，?ＺｍＷＲＩｌ－Ｂ?（ＡＩＢ０５０３６．１）?，?ＣｅＷＲＩｌ??（ＳＲＸ１０７９４３１）?，?ＰｔＷＲＩｌ?（ＸＰ?００２３１１９２１．２）?，?ＧｍＷＲＩＩ?（ＸＰ?００６５９６９８６．１）?，?ＢｄＷＲＩＩ?（Ｂｒａｉ４ｇ４３８７７），??ＡｔＷＲＩｌ?（ＡＡＰ８０３８２）?，?ＡｔＷＲＩ２?（ＡＢＧ２５０７４）?，?ＡｔＷＲＩ３?（ＮＰ＿００１３２０８５２．１）?，?ＡｔＷＲＩ４?（ＡＢＫ３２１８２．１?），??ＲｃＷＲＩ２?（ＢＡＭ７５１７９．１）?，?ＥｇＷＲＩｌ?（ＡＨＸ７１６７６．１）．??２．３．４系统发育分析??为了阐明两种ＲｃＷＲＩｌ剪接体和ＡｔＷＲＩｌ之间的系统发育关系，通过ＭＥＧＡ６．０软件，??
停粒簦祝遥桑矗?约袄醋圆煌?镏值钠渌?祝遥赏?崳?源蛋白构建系统发育树。系统发育分析显示，相比于其他三种拟南芥ＷＲＩ蛋白，ＲｃＷＲＩｌ－Ａ??和ＲｃＷＲＩｌ－Ｂ与ＡｔＷＲＩｌ最接近（图２－４），它们落入与ＡｔＷＲＩｌ和ＢｎＷＲＩｌ相同的进化??枝中。研究表明，ＡｔＷＲＩｌ是拟南芥ＷＲＩ家族成员中唯一一个负责调控种子中ＴＡＧ积累??的转录因子。??２．３．５鹿麻不同组织ＲＮＡ提取质量的检测??提取蓖麻不同组织总ＲＮＡ，将提取ＲＮＡ样品进行琼脂糖凝胶（１％）电泳检测。采用??Ｍａｒｋｅｒ?Ｄ２０００?（Ｇｅｎｓｔａｒ），上样量５?ｐＬ，ＲＮＡ样品的上样量均为５?｜ｉＬ。通过Ｂｉｏ－ｒａｄ凝胶??成像系统观察琼脂糖凝胶电泳图（图２－５）。电泳图显示提取的ＲＮＡ样品电泳条带完好，??１８Ｓ和２８Ｓ电泳条带清晰明亮。用核酸浓度测定仪（Ｂｉｏ－ｒａｄ）检测ＲＮＡ的浓度及纯度，??蓖麻花、叶、果实、果皮ＲＮＡ样品ＯＤ２６ｇ／ＯＤ２８Ｃ分别为２．０、］．９６、１．９１、２．０１。从这些检??测结果来看，这些提取的ＲＮＡ纯度符合要求，可用来做后续试验。??果实果皮叶?花Ｍａｋｅｒ??Ｂ２０００ｂｐ??ｌＯＯＯｂｐ??图２－５蓖麻各个组织ＲＮＡ１％琼脂糖凝胶电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｖａｒｉｏｕｓ?ｏｒｇａｎｓ?ｏｆ?ｃａｓｔｏｒ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｏｎ?１％?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌｓ??２．３．６?和／＾＿／厂５不同组织的表达分析??我们设计乂和的特异性引物，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ检测了和??此呢／八５在蓖麻不同组织器官中的表达情况。结果显示（图２－６）
【参考文献】：
期刊论文
[1]蓖麻RcWRI1的鉴定及表达分析[J]. 吉夏洁,郝青婷,刘宝玲,薛金爱,李润植. 山西农业大学学报(自然科学版). 2017(04)
[2]植物WRI1基因生物信息学分析[J]. 杨先友,黄春颖,吴建峰,黄有军,张启香. 分子植物育种. 2016(05)
[3]葡萄糖基氟虫腈处理下蓖麻内参基因的稳定性分析[J]. 毛根林,解云,赵俊龙,陈炎,徐汉虹,林菲. 华南农业大学学报. 2016(01)
[4]新型工业油料作物亚麻荠:从基因组到代谢工程[J]. 苑丽霞,毛雪,高昌勇,张莉,薛金爱,李润植. 植物生理学报. 2015(08)
[5]大豆GmWRI1a基因克隆及生物信息学分析[J]. 王志坤,常健敏,李丹丹,李文滨. 东北农业大学学报. 2013(07)
[6]棉花中一个新型转录因子GhWRI1的表达特征与功能分析[J]. 李鑫,王正明,薛伟,初明光. 生物技术通报. 2013(06)
[7]酿酒酵母脂酰-△9脱氢酶亚细胞定位表达及其对烟草脂肪酸合成的影响[J]. 薛金爱,毛雪,吴永美,杨致荣,贾小云,张莉,王计平,岳爱琴,孙希平,李润植. 生物工程学报. 2013(05)
[8]植物AP2/ERF类转录因子研究进展[J]. 张计育,王庆菊,郭忠仁. 遗传. 2012(07)
[9]植物含油量相关转录因子WRINKLED1的研究进展[J]. 黄胜和,丁永红,李东明,陈春香,钟小菊,饶泽昌. 生命科学. 2012(03)
[10]花生种子发育过程中脂肪酸积累规律的研究[J]. 李兰,彭振英,陈高,王莹莹,张斌,毕玉平. 华北农学报. 2012(01)
博士论文
[1]高产油小球藻基因组测序和蛋白质组学研究[D]. 高春芳.清华大学 2012
[2]真核基因剪接机制相关特征研究[D]. 李稚锋.国防科学技术大学 2006
硕士论文
[1]转运肽引导酵母酰基-Δ9脱氢酶质体定位促进烟叶组织合成积累棕榈油酸的研究[D]. 李芳.山西农业大学 2016
[2]大豆二酰甘油酰基转移酶基因（GmDGAT1A）的表达与功能分析[D]. 高秀清.山西农业大学 2016
[3]紫苏种子油脂代谢及限速酶DGAT1基因的表达分析[D]. 张玲慧.山西农业大学 2014
[4]油莎豆WRI1与APS基因克隆及过表达/RNA干扰载体构建[D]. 程超.湖北大学 2014
[5]甘蓝型油菜WRI1基因的克隆与功能分析[D]. 施春霖.湖南农业大学 2013
[6]拟南芥甘油-3-磷酸酰基转移酶的三个基因（GPAT6，7，9）在种子油脂合成及幼苗耐盐中的作用[D]. 郝静芳.南京农业大学 2013
[7]玉米苗期干旱胁迫下可变剪接及其调控因子的研究[D]. 李娇.郑州大学 2013
[8]油酸脱氢酶活性与油菜种子油酸含量的关系研究[D]. 解毅.湖南农业大学 2012
本文编号：3264245
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