水稻草酰辅酶A合成酶特性及功能研究

发布时间：2021-07-20 23:26

　　草酸广泛分布于自然界,并在很多生物体内有不同的生物学功能,它在植物抵抗生物胁迫和非生物胁迫中的重要作用尤受关注。最近在拟南芥中发现AAE3基因编码草酰辅酶A合成酶（Os OCS）,证实该酶能以草酸作为特异性底物催化合成草酰CoA,并参与草酸代谢。本研究通过生物信息学分析,分子克隆,蛋白异源表达、生物化学与酶特性分析,构建转基因材料并对其进行转录组测序及代谢物分析,研究了水稻OCS的分子、生化、酶学特性及生物学功能。主要研究结果如下:1.确定OsAAE3基因编码的蛋白为水稻草酰辅酶A合成酶根据生物信息学分析,OsAAE3蛋白与拟南芥中OCS蛋白相似性高达70%。该蛋白经大肠杆菌异源表达,纯化后大小约为56kDa,与拟南芥中的OCS蛋白大小相近,确定水稻中的OsAAE3为编码其OCS的候选基因。生化与酶学特性分析显示,OCS存在三种同工酶,其全酶分子量分别为110,221,276kDa左右,经估算亚基数分别为二聚体、三聚体和四聚体。OsAAE3蛋白以草酸为特异性底物催化合成草酰CoA,草酸的K_m值为1.72mM;酶促反应最适反应pH为7.5;最适反应温度为38℃。上述... 

【文章来源】：华南农业大学广东省

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

AAE3基因保守性分析

蛋白质巯基不仅能够调节自身蛋白的结构和功能，而且能够根据氧化强弱迅速调整巯基不同氧化形态来响应氧化还原胁迫。稻开花相关基因及其调控机理研究进展于开花植物来说，营养生长到生殖生长的转换是一个极其重要的生命进程于谷物类植物来说，在一个最优的时间点开花可以确保产量的最大化。据表明，大部分的栽培水稻在短日照条件下开花时间提前（早花），在长日照花时间延后（晚花）。开花的具体时间由一个错综复杂的调控系统来调控(, 2015)（图 1.3），除了图中参与调控开花时间的基因外，microRNA 和重塑子也参与调节水稻的开花时间。

16图 2.1 pCOLDIV 和 pET-30a 载体示意图Fig2.1 The map of pCOLDIV vector and pET-30a vectorR 扩增引物 OsAAE3 片段所用引物序列：引物：5'-GCGCGAGCTCATGGAGACCCCGACTCTGACCACG-3'SacI引物：5'-AGCGGATCCTTAATGATGATGATGATGATGCGCCTTGGTBamHI


本文编号：3293817