组蛋白乙酰化调控灵芝酸与灵芝多糖生物合成代谢的研究

发布时间：2021-08-03 10:04

　　灵芝,我国中医药宝库中的珍品,同时也是世界知名的大型药用真菌之一。在灵芝的次级代谢产物中,灵芝酸和灵芝多糖是主要的药用成分。表观遗传调控在丝状真菌次级代谢中起到重要的作用。组蛋白修饰是目前已知的最主要的表观遗传调控方式,其中组蛋白乙酰化是研究最为普遍的修饰形式。目前,液体静置培养灵芝酸和灵芝多糖生物合成的表观遗传调控研究尚未见报道。本论文以静置培养灵芝细胞为研究对象,利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他（SAHA）调节灵芝细胞组蛋白乙酰化水平,初步研究了组蛋白乙酰化对灵芝生长发育以及灵芝酸和灵芝多糖生物合成的调控机制。振荡培养和深层液体静置培养是目前主要的灵芝发酵培养方式,研究表明静置培养方式有利于灵芝酸的积累。本实验发现,在灵芝多糖生物合成方面,摇瓶培养方式更占优势,其中摇瓶培养方式下最大灵芝胞外多糖产量是静置培养方式的10倍;摇瓶培养方式下,胞内多糖产量是静置培养方式的1.32倍。蛋白质免疫印迹结果表明静置培养方式下灵芝细胞组蛋白H3、H4乙酰化水平分别是摇瓶培养方式的1.5倍和3倍。在液体静置培养过程中,添加不同浓度SAHA处理灵芝细胞,结果发现,SAHA的处理,抑制了灵芝菌丝体生... 

【文章来源】：福建师范大学福建省

【文章页数】：106 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图５核心组蛋白与核小体??

Ｄ：?Ｍｙｃｅｌｉａ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｌｉｑｕｉｄ?ｓｔａｔｉｃ?ｃｕｌｔｕｒｅ??２．２培养方式对灵芝生物量的影响??如图１－２所示，两种培养条件下，灵芝细胞生物量均随着培养天数的增加而增加。??与液体静置培养相比，灵芝细胞在振荡发酵培养时总的生物量更高。但是培养６天内，??静置培养方式下灵芝细胞干重增加了６?ｇ／Ｌ，高于摇瓶培养方式下的细胞干重的增加。??对比两种培养方式下灵芝细胞生长量的变化，可见摇瓶振荡培养方式风有利于短时??间内得到较多的灵芝菌丝体生物量。

丝分化与代谢差异，本实验检测了不同培养方式下灵芝细胞组蛋白乙酰化水平。??分别收取第９天两种培养方式的灵芝细胞并提取总蛋白，用Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测??组蛋白Ｈ３、Ｈ４的泛乙酰化水平。结果如图１－６所示。从图１－６?Ａ中可以看出，两种培??养方式下灵芝乙酰化的组蛋白相对于Ｈ３?（内参）的水平有显著差异的。从蛋白免疫??印迹图谱中可以看出静置培养条件下灵芝细胞组蛋白Ｈ３、Ｈ４乙酰化水平高于摇瓶培??养方式。通过Ｉｍａｇｅ?Ｊ软件对蛋白条带进行灰度值分析（图１－６?Ｂ），发现两种培养方??式下灵芝细胞组蛋白乙酰化水平具有显著性差异（；７＜（）．０５），静置培养条件下组蛋白??Ｈ４乙酰化水平是摇瓶培养的１．５倍，Ｈ３乙酰化水平更高，是摇瓶培养方式的３倍。根??据表观遗传调控研宄表明，组蛋白乙酰化和去乙酰化与基因的表达与沉默有关。基??于实验结果我们初步推断可能是组蛋白的乙酰化与去乙酰化，通过调节相关基因的??－３０－??

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]DNA甲基化调控灵芝酸生物合成代谢的研究[D]. 蓝丽雯.福建师范大学 2016



本文编号：3319425