普通小麦TaNRX1基因的克
发布时间：2021-08-17 02:36
小麦是世界上最重要的粮食作物之一,高产优质是小麦育种的重要目标。干旱是限制小麦生产的最严重的非生物胁迫因素,核氧还蛋白（Nucleoredoxin,NRX）与小麦的抗旱性相关;色泽是小麦面制品评价重要指标之一,脂肪氧化酶（Lipoxygenase,LOX）活性与小麦面制品品质密切相关。研究小麦抗旱和面制品色泽相关的基因,可为高产优质小麦新品种选育奠定基础。本研究选用干旱耐受型小麦品种晋麦47为材料,采用比较基因组学的方法,获得了普通小麦硫氧还蛋白（Thioredoxin,TRX）超家族新成员NRX基因TaNRX1的3个部分同源基因的cDNA（complementary DNA,cDNA）和gDNA（genomic DNA,gDNA）序列,对该基因编码蛋白的特征进行分析并明确基因的结构,进行响应干旱胁迫表达分析,预测启动子区域顺式作用元件,并构建植物过表达载体,为进一步基因功能解析奠定基础。利用SSR标记Xwmc312和STS标记LOX16和LOX18对180份宁夏小麦QLpx.cass-1AL和TaLOX-B1位点的TaLOX基因组成进行检测与分析,为宁夏小麦品质育种和生产提供理论依据...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同类型NRX的结构域组成比较（引自Marchal等2014）
12普通小麦TaNRX1基因的克垄表达分析和载体构建及宁夏小麦TaLOX基因的组成分析守区域设计反转录PCR（ReverseTranscriptionPCR,RT-PCR）同源引物。TaNRX1-cF:5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-cR:5′-CATCACACCACACAGCACAT-3′图2-1电子拼接流程Figure2-1Theprocedureofinsilicosplicing2.1.8.2gDNA序列的引物设计为了获得TaNRX1基因的gDNA序列，以该基因的cDNA序列为模板，利用PrimerPremier5.0软件和Oligo7软件及Primerdesigningtool（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast）在该基因的ORF之外设计PCR同源引物。TaNRX1-gF：5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-gR：5′-CAGCTGGCAAGGAACACACAC-3′2.1.8.3TaNRX1-2D基因的引物设计为了使TaNRX1基因能够在生物体内完整、准确的表达，根据TaNRX1基因的3个部分同源基因cDNA序列间的差异，将下游引物设计在序列差异较大的3′-UTR，上游引物设计在5′-UTR，分离包含完整ORF的cDNA序列，由于3个部分同源基因cDNA序列的一致性很高，只设计出能够分离D基因组序列的引物。TaNRX-cD-F5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX-cD-R5′-GCAAGGAACACACACAACGCC-3′（加粗加下划线部分代表起始密码子，其前面有15bp的碱基序列，不会改变ORF）2.1.8.4插入片段的引物设计根据表达载体的使用要求和包含完整ORF的特异基因TaNRX1-2D，设计引物如下：TaNRX-OE-cDF5′-tctagaggatccccg/ggtacc/AAGCGAAGGCACCGGATG-3′
第二章普通小麦TaNRX1基因的克垄表达分析和载体构建1728S5S18S221bp5000bp750bp250bpM12图2-2普通小麦总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测结果Figure2-2TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheattotalRNA2.2.2cDNA使用cDNA直接电泳法和内参引物扩增法对反转录结果进行检测（图2-3），电泳结果表明，分离到的cDNA呈现清晰的弥散状条带，EF-1α基因的PCR扩增产物条带清晰，说明cDNA第一链合成成功，可用于后续试验。图2-3普通小麦cDNA第一链的琼脂糖凝胶电泳检测结果M：Trans2kplusDNAMarker；1：cDNA；2：扩增产物Figure2-3TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheatcDNAfirststrandM:Trans2kplusDNAMarker;1:cDNA;2:Amplificationproducts2.2.3TaNRX1cDNA本研究以课题组前期得到的1个核氧还蛋白的序列（GenBank登录号AHL29285）为探针，在EnsemblPlants数据库（http://plants.ensembl.org/index.html）进行同源搜索，得到的3条序列中有2条不符合后续试验要求，以这2条序列为种子序列筛选小麦EST数据库，各得到48条一致性较高的EST序列。利用DNAMAN8软件进行拼接，得到2条长度分别为1979和2007bp的序列。通过NCBI网站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）的ORFFinder程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）对2条拼接序列和原本符合后续试验要求的序列进行预测，得到3个长度分别为1731、1743和1734bp的
本文编号：3346888
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同类型NRX的结构域组成比较（引自Marchal等2014）
12普通小麦TaNRX1基因的克垄表达分析和载体构建及宁夏小麦TaLOX基因的组成分析守区域设计反转录PCR（ReverseTranscriptionPCR,RT-PCR）同源引物。TaNRX1-cF:5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-cR:5′-CATCACACCACACAGCACAT-3′图2-1电子拼接流程Figure2-1Theprocedureofinsilicosplicing2.1.8.2gDNA序列的引物设计为了获得TaNRX1基因的gDNA序列，以该基因的cDNA序列为模板，利用PrimerPremier5.0软件和Oligo7软件及Primerdesigningtool（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast）在该基因的ORF之外设计PCR同源引物。TaNRX1-gF：5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX1-gR：5′-CAGCTGGCAAGGAACACACAC-3′2.1.8.3TaNRX1-2D基因的引物设计为了使TaNRX1基因能够在生物体内完整、准确的表达，根据TaNRX1基因的3个部分同源基因cDNA序列间的差异，将下游引物设计在序列差异较大的3′-UTR，上游引物设计在5′-UTR，分离包含完整ORF的cDNA序列，由于3个部分同源基因cDNA序列的一致性很高，只设计出能够分离D基因组序列的引物。TaNRX-cD-F5′-AAGCGAAGGCACCGGATG-3′TaNRX-cD-R5′-GCAAGGAACACACACAACGCC-3′（加粗加下划线部分代表起始密码子，其前面有15bp的碱基序列，不会改变ORF）2.1.8.4插入片段的引物设计根据表达载体的使用要求和包含完整ORF的特异基因TaNRX1-2D，设计引物如下：TaNRX-OE-cDF5′-tctagaggatccccg/ggtacc/AAGCGAAGGCACCGGATG-3′
第二章普通小麦TaNRX1基因的克垄表达分析和载体构建1728S5S18S221bp5000bp750bp250bpM12图2-2普通小麦总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测结果Figure2-2TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheattotalRNA2.2.2cDNA使用cDNA直接电泳法和内参引物扩增法对反转录结果进行检测（图2-3），电泳结果表明，分离到的cDNA呈现清晰的弥散状条带，EF-1α基因的PCR扩增产物条带清晰，说明cDNA第一链合成成功，可用于后续试验。图2-3普通小麦cDNA第一链的琼脂糖凝胶电泳检测结果M：Trans2kplusDNAMarker；1：cDNA；2：扩增产物Figure2-3TestresultsofagarosegelelectrophoresisofwheatcDNAfirststrandM:Trans2kplusDNAMarker;1:cDNA;2:Amplificationproducts2.2.3TaNRX1cDNA本研究以课题组前期得到的1个核氧还蛋白的序列（GenBank登录号AHL29285）为探针，在EnsemblPlants数据库（http://plants.ensembl.org/index.html）进行同源搜索，得到的3条序列中有2条不符合后续试验要求，以这2条序列为种子序列筛选小麦EST数据库，各得到48条一致性较高的EST序列。利用DNAMAN8软件进行拼接，得到2条长度分别为1979和2007bp的序列。通过NCBI网站（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）的ORFFinder程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）对2条拼接序列和原本符合后续试验要求的序列进行预测，得到3个长度分别为1731、1743和1734bp的
本文编号：3346888
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