基于转录组分析的绞股蓝氧化鲨烯环化酶的挖掘与鉴定

发布时间：2021-08-31 19:40

　　绞股蓝（Gyostemma pentoaphyllun（Thunb.）Makino）属于葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物,其主要有效成分为绞股蓝皂苷,在叶片中含量最高,目前分离鉴定的绞股蓝皂苷已达160余种。现代药理学研究表明绞股蓝皂苷具有抗肿瘤、抗焦虑、抗动脉粥样硬化、调节免疫力、降血糖、降血脂等多种药理活性。绞股蓝皂苷属于三萜皂苷,因与人参皂苷具有相同或相似的化学结构而备受关注。氧化鲨烯环化酶（OSCs）是绞股蓝皂苷三萜骨架结构合成的关键酶,本研究对绞股蓝OSCs进行了克隆和鉴定,为进一步研究绞股蓝皂苷的合成与调控奠定了基础。植物信号分子茉莉酸甲酯（MeJA）可以诱导绞股蓝皂苷上游合成途径中的法尼基焦磷酸合酶（FPS）和鲨烯合酶（SS）基因上调表达,因此,我们推测参与绞股蓝皂苷合成的OSCs基因也可能受MeJA调控。对MeJA处理0h,6h,12h,24h的绞股蓝叶的转录组进行了 Illumina测序,共获取202,535,156条raw reads,采用denovo组装共获得82,073条unigenes。通过基因注释和分类,发现在GO分析中,有22,662个unigenes得到... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 转录组及转录组测序技术
        1.1.1 转录组
        1.1.2 转录组测序技术
        1.1.3 绞股蓝转录组研究进展
    1.2 绞股蓝皂苷合成途径
        1.2.1 绞股蓝的主要活性成分
        1.2.2 三萜皂苷的生物合成
        1.2.3 氧化鲨烯环化酶
    1.3 绞股蓝转录组及途径解析研究目的及意义
第二章 研究材料及方法
    2.1 材料、试剂与设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 试剂
        2.1.3 主要设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 cDNA的获取
            2.2.1.1 样品处理
            2.2.1.2 RNA提取及高通量测序
            2.2.1.3 反转录
        2.2.2 实时荧光定量PCR
        2.2.3 目的基因获取
            2.2.3.1 引物设计
            2.2.3.2 候选OSCs基因扩增
            2.2.3.3 PCR产物琼脂糖凝胶回收
            2.2.3.4 胶回收产物连接到T载体
            2.2.3.5 大肠杆菌转化及阳性克隆筛选
        2.2.4 目的基因连接到表达载体
            2.2.4.1 质粒提取
            2.2.4.2 对目的基因添加酶切位点
            2.2.4.3 目的基因双酶切连接到表达载体
        2.2.5 目的基因转化酿酒酵母
        2.2.6 诱导目的基因表达
        2.2.7 产物提取及检测
第三章 结果
    3.1 基于Illumina二代测序平台的绞股蓝转录组分析
        3.1.1 预处理及测序数据质量评估
        3.1.2 转录本组装
        3.1.3 基因功能注释
        3.1.4 差异表达分析
    3.2 候选OSCs的获取及生物信息学分析
        3.2.1 OSCs候选基因的筛选
        3.2.2 OSCs生物信息学分析
    3.3 OSCs的实时荧光定量PCR分析
        3.3.1 OSCs在绞股蓝不同部位的表达分析
        3.3.2 MeJA诱导不同时间的OSCs表达分析
    3.4 候选OSCs基因在酵母中表达及酶活性检测
        3.4.1 表达载体的构建
        3.4.2 候选OSCs在酵母中的诱导表达
        3.4.3 候选OSCs表达产物的检测
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
缩略词
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[2]羽扇豆醇对人肝癌细胞Wnt通路影响的研究[D]. 田孜博.河北医科大学 2014
[3]Lupeol对肝细胞肝癌的抑制作用及其机制研究[D]. 刘芬.苏州大学 2011



本文编号：3375499