转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

发布时间：2021-09-25 06:06

　　抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种,该品种于2020年1月21日获得农业转基因生物安全证书,具有广阔的应用前景。转化体特异性PCR方法是进行转基因生物安全监管的最有效的技术手段之一,可以对转基因产品进行身份鉴定。本研究组织8家实验室对研发单位提供的的双抗12-5转化体特异性定性、定量PCR方法进行了验证,验证结果显示定性与定量PCR检测方法均具有稳定性好、特异性强和灵敏度高的特点,定量PCR方法能精确地定量检测质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品,并且具有良好的重复性和再现性,符合相关标准的要求。本研究有助于后续标准方法的建立和完善,为我国转基因生物安全监管提供技术支撑和决策依据。 

【文章来源】：生物技术通报. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

定性PCR和定量PCR引物位置示意图

按照上述定性PCR反应体系,用双抗12-5转化体特异性定性引物扩增相应的待测样品。经8家实验室验证结果显示,在定性PCR方法特异性检测中,所有实验室均从含有双抗12-5样品中扩增出其转化体特异性序列,且片段大小与预期一致,在其他转基因玉米混样、转基因大豆混样、转基因棉花混样、转基因水稻混样、转基因油菜混样、非转基因玉米混样和阴性样品中均未扩增出双抗12-5转化体特异性序列;在灵敏度检测中,所有实验室均从质量分数为0.1%的双抗12-5样品中扩增出其转化体特异性序列,且片段大小与预期一致,以3号实验室的结果为例,见图2。8家实验室具体验证结果见表4。综上说明,研发单位提供的转基因玉米双抗12-5转化体特异性定性PCR方法具有良好的特异性,检测灵敏度达到0.1%。

将8家实验室提供的数据和结果进行汇总分析,采用科克伦(Cochran)法和格拉布斯(Grubbs)法对测试结果进行异常值检验,在实验室数量为8、置信区间为5%的条件下,科克伦检验和格拉布斯检验的临界值分别为:0.680和2.126[8],分别计算8家实验室的科克伦统计量C值和格拉布斯统计量G值[8]。经计算,5%质量分数样品中1号实验室的G值和6号实验室的C值大于临界值,为2组异常值,0.5%质量分数样品无异常值。剔除异常值后,计算出每个实验室2份准确性样品的测量平均值,得出测量值与真值的偏差(Bias),6家实验室5%样品测试值与真值的偏差的范围在-8.30%-0.40%之间,8家实验室0.5%样品测试值与真值的偏差的范围在-10.0%-62.0%之间(见图3)。综合8家实验室中的有效数据计算5%和0.5%准确性样品的测量平均值分别为4.88%和0.61%,偏差分别为2.47%和21.38%,大多数的偏差主要是正值,具体数据见表7。质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品的偏差小于25%。验证结果表明,双抗12-5定量方法能准确地定量检测质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品。2.2.4 重复性和再现性


本文编号：3409248