甘蔗原生质体的分离与培养体系的建立和优化

发布时间：2021-10-10 08:49

　　为了获得高产优质的甘蔗原生质体细胞,为获得甘蔗原生质体再生植株打下基础,本研究以新台糖22号ROC22和桂糖28号GT28幼叶为材料,研究了甘蔗原生质体分离的影响因素、原生质体培养程序及相关的技术环节,对ROC22和GT28甘蔗原生质体的分离、纯化和培养条件进行优化,研究结果表明:1.酶解前质壁分离0.5h与质壁分离0h相比:GT28和ROC22原生质体的产量和活力分别增加了65.62%、2.08%和 105.94%、1.84%;2.在酶液组合0.5%果胶酶+2%纤维素酶+0.3%半纤维素酶+0.1%离析酶下,ROC22原生质体的产量和活力最高,分别为:2.55×107个·g-1和98.54%;GT28原生质体的产量和活力最高,分别为:2.05×107个·g-1和99.83%;3.不同酶解时间对原生质体产量影响差异显著,在酶解10 h时,ROC22和GT28原生质体的产量分别比酶解5 h时增加了 35.4%和89.81%,酶解10 h最适合甘蔗原生质体的分离;4.甘蔗原生质体纯化最适合的离心速率是800 rpm,GT28和ROC22原生质体的产量达到最高,分别为2.1×107个·g-1... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２－１原生质体的三种培养方式??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｒｅｅ?ｍｅｔｈｏｄｓ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ??

ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ；?Ｌ．?Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ??在加入１３％ＣＰＷ质壁分离时，因１３％ＣＰＷ浓度较高，材料漂浮在液面之上（图??３－１－Ｇ），在质壁分离０．５ｈ后，材料有的下沉至管底（图３－１－Ｈ），此时材料比质壁分??离前要松软（图３－１－１），在加入酶液后，材料都沉至管底（图３－１－Ｊ），酶解１０?ｈ后，??材料非常松散（图３－１－Ｋ），轻轻吹打就可以将材料打成均匀的糊状，此时原生质体的??酶解完成。??３．２原生质体纯化体系的构建??在原生质体的纯化过程中，将刚酶解完的原生质体（图３－２－Ａ）先用细胞筛（图３－??２－Ｂ、Ｃ）去除大的没有酶解掉的组织，细胞筛过滤后原生质体滤液是非常均匀地液??体，没有肉眼可见的组织块（图３－２－Ｄ），离心后，原生质体沉在管底（图３－２－Ｆ），??打匀后，可见原生质体液颜色偏淡褐色（图３－２－Ｇ），在显微镜下可以看到边缘清晰，??大小均匀

广西大学硕士学位论文?甘鹿原生质休分商与培养体系的延立和优化??图３－３甘蔗原生质体培养体系的构建??Ｆｉｇ．３－３?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｓｙｓｔｅｍ?ｏｆ?ｓｕｇａｒｃａｎｅ??注：Ａ．加入酶液１０?ｈ后；Ｂ．分离的原生质体，ｂａｒ＝１０?ｊｉｍ；?Ｃ．有活力的原生质体，ｂａｒ＝１０?ｐｍ；?Ｄ．??液体培养；Ｅ．光照培养箱；Ｆ．微滴培养；Ｇ．原生质体第１次分裂；Ｈ．原生质体第２次分裂；Ｉ．原??生质体第３次分裂；Ｊ、Ｋ．小细胞团；Ｌ．小愈伤组织??Ｎｏｔｅ：?Ａ．?Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ?ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ?１０?ｈ；?Ｂ．?Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ，?ｂａｉ－１０?｝ｉｍ；?Ｃ．?Ｖｉａｂｌｅ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ，?ｂａｒ＝１０?（ｉｍ；?Ｄ．??Ｌｉｑｕｉｄ?ｃｕｌｔｕｒｅ；?Ｅ．?Ｌｉｇｈｔ?ｉｎｃｕｂａｔｏｒ?；?Ｆ．?Ｍｉｃｒｏｄｒｏｐ?ｃｕｌｔｕｒｅ；?Ｇ．?Ｆｉｒｓｔ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｈ．??Ｓｅｃｏｎｄ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｉ．?Ｔｈｉｒｄ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ?ｏｆ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；Ｊ、Ｋ．?Ｃｅｌｌ?ｃｌｕｓｔｅｒ??ｆｏｍｉｅｄ?ｆｉ＇ｏｍ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ；?Ｌ．?Ｍｉｃｒｏｃａｌｌｉ?ｆｏｒｍｅｄ?ｆｒｏｍ?ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ?ｃｅｌｌ??３．４原生质体分离和纯化体系的优化??３．４．１不同酶液组合对甘蔗原生质体产量的影响??


本文编号：3428051