CRISPR/Cas9介导的丹参基因组编辑与丹参酮合成路径的研究

发布时间：2021-10-18 12:17

　　中药丹参来源于唇形科多年生的草本药用植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根和根茎。广泛分布于中国各地,种质资源丰富。丹参药用历史悠久,始载于《神农本草经》,具有祛瘀止痛、通经活血、清心除烦的功效,被用于治疗心绞痛、月经不调、痛经、瘀血腹痛等疾病。近年来研究发现其在保护心肌、扩张血管、抗动脉粥样硬化、抗血栓、保肝及抗菌消炎方面有明显疗效。丹参中主要有效成分是脂溶性的丹参酮类和水溶性酚酸类化合物,包括丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、丹参素、丹酚酸等。丹参酮类化合物是二萜醌结构,是类异戊二烯代谢途径产生的,前体物质是牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸（Geranylgeranyldiphosphate,GGPP）,但其下游合成通路的很多基因的功能尚不清楚。因此,如何挖掘这些基因的功能非常重要。近年来,一种有效的基因敲除工具 CRISPR（clustered regulatory interspaced short palindromic repeats）/Cas9（CRISPR associated protein 9）的出现,为基因功能研究提供了很大助力。它可以... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：141 页

【学位级别】：博士

【图文】：

图１．丹参酮生物合成途径（ＧＧＰＰ下游）??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｓ?ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ?（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ＧＧＰＰ）??

华中科技大学博士学位论文??实验的流程如图２：??自交五代白花丹参无菌苗???Ｊ???以丹参酮途径基因为对象???ｙ?［???设计靶点??构建ＣＲＩＳＰＲ载体??转化Ａｃｃｃｌ００６０发根农杆菌?观察表型????？??获得游离转基因毛状根——提取ＤＮＡ鉴定突变体???１?！?无变化???化合物含量测定??？分析原因??，ｒ???推测基因功能??图２．实验流程图??

生长条件??地为山东莱芜的白花丹参为研宄材料。白花丹参作物研宄基地大棚，自然光照，白天温度是２０－２５除地上部分，只保留地下部分（根系）。开花期早授粉后去除雄蕊并套袋。最终获得自交五代的丹于ＭＳ无菌培养基中，置于培养室培养。培养室湿度８０％－９０％，光照为１６ｈ／８ｈ?（昼／夜）。??图?３）、３５Ｓ－Ｃａｓ９－ＳＫ?（图?４）以及?ｐＣａｍｂｉａｌ３００?（科学研究院的朱健康老师实验室的张波涛博士惠

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]丹参酮类化合物生物合成相关酶基因克隆及功能研究[D]. 高伟.中国中医科学院 2008



本文编号：3442785