转phyA2、ZmTMT和Bar玉米的获得及其特性分析

发布时间：2021-10-21 16:26

　　【目的】玉米是家禽和单胃动物饲料的主要原料,但玉米籽粒中高活性的α-生育酚含量较低,且籽粒中的磷主要是以植酸磷的形式存在,动物不能有效吸收利用,因此,饲料中需要添加化学合成的维生素E和无机磷或微生物来源的植酸酶以满足动物生长发育的需要,增加了饲料成本,同时又容易造成磷污染。通过转基因获得α-生育酚含量和植酸酶活性大量提高的玉米,为饲用玉米育种提供材料基础。【方法】构建含有3个基因表达盒的载体,采用农杆菌侵染的方法转化玉米,草铵膦作为筛选压力;通过喷施草铵膦和PCR鉴定的方法筛选转基因阳性植株,RT-PCR分析目的基因在转录水平的表达情况;Western blot分析目的基因在翻译水平上的表达情况,采用分光光度计测定转基因玉米籽粒中的植酸酶活性,利用HPLC测定籽粒中的维生素E含量,同时比较转基因株系与野生型在其他营养成分和农艺性状上的差异。【结果】构建了胚乳特异性启动子123387驱动的植酸酶基因phyA2表达盒、胚特异性启动子13387驱动的玉米γ-生育酚甲基转移酶基因ZmTMT表达盒以及组成型启动子CaMV35S驱动的草铵膦抗性基因Bar表达盒串联的植物表达载体;转化玉米获得转基因... 

【文章来源】：中国农业科学. 2020,53(24)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【部分图文】：

载体构建示意图

为了确定转基因株系籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的表达情况，提取成熟籽粒的总蛋白进行Western blot分析（图3）。phy A2、Zm TMT和Bar蛋白在转基因株系TPB1和TPB2的籽粒中均有表达。Zm TMT蛋白为玉米内源蛋白，不但在转基因株系有表达，在WT中也有表达，但在WT中的表达与在转基因株系中的表达差异并不明显，推测可能的原因是，Zm TMT是维生素E合成途径中的关键酶，Zm TMT蛋白可能部分在发挥功能之后被降解；另外，用于阳性对照的Zm TMT蛋白是原核表达的融合蛋白，大小约38 k D，而Zm TMT蛋白本身含有叶绿体定位信号肽，在植物体内信号肽被去除之后其蛋白大小约为33k D，这也是Zm TMT的蛋白杂交条带与阳性对照有差异的原因（图3-A）。Bar和phy A2蛋白均为外源蛋白，因此，2个蛋白只在转基因株系TPB1和TPB2中有表达，而在WT中无表达（图3-B和图3-C）。图3 成熟籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的Western blot分析

成熟籽粒中phy A2、Zm TMT和Bar蛋白的Western blot分析

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3449337