水稻类受体蛋白激酶LRK2下游互作基因的功能初探及水稻黄绿叶基因YGL15的功能分析
发布时间：2021-10-23 00:07
水稻作为一种最主要的粮食作物哺育着全球近半数人口。分蘖数是水稻重要的农艺性状之一,分蘖对于水稻的产量构成具有决定性作用,合适的分蘖能力是水稻理想株型育种的重要目标。在前期研究中发现过表达LRK2转基因株系提高了有效分蘖数,同时显著提高对干旱胁迫的耐/抗能力,另外,还发现LRK2能与真核翻译延伸因子OsEF1A互作。为了分析LRK2下游互作基因OsEF1A的功能,将该基因通过转基因技术在水稻中过表达,对过表达植株进行功能的初步探讨,并进行组织特异性表达分析,这有助于我们对LRK2下游互作基因OsEF1A的功能进行初步的了解。在本实验中我们研究了过表达OsEF1A株系在各种逆境胁迫下的适应性反应,来探索水稻中OsEF1A在逆境胁迫响应中的生物学功能。另外,通过酵母双杂交技术进一步筛选LRK2与OsEF1A的互作蛋白区域,同时还筛选了其它能与LRK2互作的下游蛋白。本实验为LRK2下游互作基因的功能初探提供了新的信息资源。具体研究结果如下:（1）利用生物统计学的方法,统计过表达OsEF1A株系的农艺学性状,包括有效分蘖数、株高和千粒重等。结果表明过表达OsEF1A显著提高了有效分蘖数;降低了...
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．丨纯合株系的筛选??（Ａ）?Ｈｙｇ抗性筛选（左：纯合株系，右：野生型株系）；（Ｂ）抗性培养基上根的生长．（左：纯合??
结果分析??．１酵母双杂交??将ＯｓＥＦｌＡ?￡个结构域分开，构建的多个载体分别包含其从Ｎ端到Ｃ端的１到２３０ａａ??（０ｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－ｌ），２３１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－２）?，?３２丨到?４４７ａａ?（０ｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ），??１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－３），２３１?到?４４７ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－２）。经过酵母双杂交发现，??ｓＥＦｌＡ中３２１到４４７ａａ（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ）的Ｃ端羧基域是与ＬＲＫ２Ｄ相互作用的直接区??，也是必要Ｋ域。??同时，通过实验发现能与／ＡＫ２相互作用的另外两个下游基因：负责编码水稻超氧??物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，?ＳＯＤ）的基因以及负责编码水稻Ｃ０Ｐ９信号??合体（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ?Ｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ，ＣＳＮ）的基因?ｔｔｖｄＴＶｏ??Ａ?Ｂ??
为了探究ＬＲＫ２下游互作基因的在水稻中功能，利用??ｐ／Ｊ洲－２?ｘＪ５ｗＧＦ尸空载体构建其过表达载体，以野生型Ｎｉｐ幼苗总ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ??得到（９Ｍ０Ｚ）、ａＣＭ的基因目的片段（如图４．２Ｂ、Ｄ所示），构建载体，经酶切鉴定??（如图４．２Ｃ、Ｅ所示）后测序，确定过表达载体构建成功。??Ａ?ｐＪ３０〇ｘ３５ｓ：：ｅＧＦＰ?Ｖｅｃｔｏｒ??２？：３５Ｓ?ＯｓＳＯＤ?關??Ｊｘｉ５，Ｓ?；?ＯｓＣＳＮ??Ｂ?Ｍ?ＯｓＳＯＤ?Ｃ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??Ｄ?Ｍ?ＯｓＣＳＮ?Ｅ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??图４．２?ＯｓＳＯＺ）、ＯｓＣ；Ｗ过表达栽体构建??（Ａ）过表达载体示意图；（Ｂ）?Ｏ＾ＯＤ的ＰＣＲ扩增产物；（Ｃ）?ｅＧＦＰ质粒酶??切鉴定；（Ｄ）?０．？Ｃ幻Ｖ的ＰＣＲ扩增产物；（Ｅ）尸／卯０－２＞＜＿＾．．化（：：例．．．．ｅＧＦＰ质粒酶切鉴定。Ｍ，?ＤＮＡ??分子量标记；ＣＫ，阳性对照；Ｕ：未酶切的质粒：Ｄ：酶切后的质粒。??Ｆｉｇ?４．２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ??（Ａ）?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ
【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻叶色突变基因的遗传研究进展[J]. 方希林,王悦,朱敏敏,邓跃军,张晶,李恩宇. 北方水稻. 2016(06)
[2]水稻叶色突变体812HS蛋白质复合物和叶绿素合成特性的研究[J]. 蒋苑,刘莉,吕春芳,陈国祥,高志萍,吕川根. 江苏农业科学. 2016(10)
[3]水稻转基因技术及新品种培育[J]. 叶荣建,林拥军. 生命科学. 2016(10)
[4]一个新的水稻黄绿叶突变体的遗传分析及突变基因的精细定位[J]. 何旎清,柳周,张龙,白苏阳,田云录,江玲,万建民. 作物学报. 2015(08)
[5]水稻单叶独立转绿型黄化突变体grc2的鉴定与基因精细定位[J]. 谭炎宁,孙学武,袁定阳,孙志忠,余东,何强,段美娟,邓华凤,袁隆平. 作物学报. 2015(06)
[6]植物转基因技术研究进展[J]. 骆翔,刘志颐,章树民,申硕,王德福,王劲松. 中国农学通报. 2014(15)
[7]真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展[J]. 高爽,查笑君,潘建伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2013(04)
[8]RNA干扰及其在植物研究中的应用[J]. 王婷婷,王丹丹,Rahman LaibiChelab,康丹,游腾飞,眭安平,杨星勇. 生物技术通报. 2013(03)
[9]一个水稻温度敏感失绿突变体的遗传分析及分子定位[J]. 董彦君,林冬枝,梅杰,苏倩倩,张建辉,叶胜海,张小明. 分子植物育种. 2013(01)
[10]水稻叶色突变基因研究进展[J]. 邓晓娟,张海清,王悦,舒志芬,王国槐,王国梁. 杂交水稻. 2012(05)
硕士论文
[1]水稻新黄绿叶基因YGL9的鉴定和图位克隆[D]. 张天泉.西南大学 2016
[2]拟南芥网格蛋白轻链的功能分析[D]. 王超.浙江师范大学 2012
本文编号：3452079
【文章来源】：浙江师范大学浙江省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２．丨纯合株系的筛选??（Ａ）?Ｈｙｇ抗性筛选（左：纯合株系，右：野生型株系）；（Ｂ）抗性培养基上根的生长．（左：纯合??
结果分析??．１酵母双杂交??将ＯｓＥＦｌＡ?￡个结构域分开，构建的多个载体分别包含其从Ｎ端到Ｃ端的１到２３０ａａ??（０ｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－ｌ），２３１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－２）?，?３２丨到?４４７ａａ?（０ｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ），??１?到?３２０ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－ＡＤ３－３），２３１?到?４４７ａａ?（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－２）。经过酵母双杂交发现，??ｓＥＦｌＡ中３２１到４４７ａａ（ＯｓＥＦｌＡ－Ｄ３－ｌ）的Ｃ端羧基域是与ＬＲＫ２Ｄ相互作用的直接区??，也是必要Ｋ域。??同时，通过实验发现能与／ＡＫ２相互作用的另外两个下游基因：负责编码水稻超氧??物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，?ＳＯＤ）的基因以及负责编码水稻Ｃ０Ｐ９信号??合体（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ?Ｐｈｏｔｏｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｓｉｇｎａｌｏｓｏｍｅ，ＣＳＮ）的基因?ｔｔｖｄＴＶｏ??Ａ?Ｂ??
为了探究ＬＲＫ２下游互作基因的在水稻中功能，利用??ｐ／Ｊ洲－２?ｘＪ５ｗＧＦ尸空载体构建其过表达载体，以野生型Ｎｉｐ幼苗总ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ??得到（９Ｍ０Ｚ）、ａＣＭ的基因目的片段（如图４．２Ｂ、Ｄ所示），构建载体，经酶切鉴定??（如图４．２Ｃ、Ｅ所示）后测序，确定过表达载体构建成功。??Ａ?ｐＪ３０〇ｘ３５ｓ：：ｅＧＦＰ?Ｖｅｃｔｏｒ??２？：３５Ｓ?ＯｓＳＯＤ?關??Ｊｘｉ５，Ｓ?；?ＯｓＣＳＮ??Ｂ?Ｍ?ＯｓＳＯＤ?Ｃ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??Ｄ?Ｍ?ＯｓＣＳＮ?Ｅ?Ｍ?ＣＫ?Ｕ?Ｄ?Ｄ??图４．２?ＯｓＳＯＺ）、ＯｓＣ；Ｗ过表达栽体构建??（Ａ）过表达载体示意图；（Ｂ）?Ｏ＾ＯＤ的ＰＣＲ扩增产物；（Ｃ）?ｅＧＦＰ质粒酶??切鉴定；（Ｄ）?０．？Ｃ幻Ｖ的ＰＣＲ扩增产物；（Ｅ）尸／卯０－２＞＜＿＾．．化（：：例．．．．ｅＧＦＰ质粒酶切鉴定。Ｍ，?ＤＮＡ??分子量标记；ＣＫ，阳性对照；Ｕ：未酶切的质粒：Ｄ：酶切后的质粒。??Ｆｉｇ?４．２?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ??（Ａ）?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｏｖｅｒ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ＯｓＳＯＤ?ａｎｄ?ＯｓＣＳＮ
【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻叶色突变基因的遗传研究进展[J]. 方希林,王悦,朱敏敏,邓跃军,张晶,李恩宇. 北方水稻. 2016(06)
[2]水稻叶色突变体812HS蛋白质复合物和叶绿素合成特性的研究[J]. 蒋苑,刘莉,吕春芳,陈国祥,高志萍,吕川根. 江苏农业科学. 2016(10)
[3]水稻转基因技术及新品种培育[J]. 叶荣建,林拥军. 生命科学. 2016(10)
[4]一个新的水稻黄绿叶突变体的遗传分析及突变基因的精细定位[J]. 何旎清,柳周,张龙,白苏阳,田云录,江玲,万建民. 作物学报. 2015(08)
[5]水稻单叶独立转绿型黄化突变体grc2的鉴定与基因精细定位[J]. 谭炎宁,孙学武,袁定阳,孙志忠,余东,何强,段美娟,邓华凤,袁隆平. 作物学报. 2015(06)
[6]植物转基因技术研究进展[J]. 骆翔,刘志颐,章树民,申硕,王德福,王劲松. 中国农学通报. 2014(15)
[7]真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展[J]. 高爽,查笑君,潘建伟. 浙江师范大学学报(自然科学版). 2013(04)
[8]RNA干扰及其在植物研究中的应用[J]. 王婷婷,王丹丹,Rahman LaibiChelab,康丹,游腾飞,眭安平,杨星勇. 生物技术通报. 2013(03)
[9]一个水稻温度敏感失绿突变体的遗传分析及分子定位[J]. 董彦君,林冬枝,梅杰,苏倩倩,张建辉,叶胜海,张小明. 分子植物育种. 2013(01)
[10]水稻叶色突变基因研究进展[J]. 邓晓娟,张海清,王悦,舒志芬,王国槐,王国梁. 杂交水稻. 2012(05)
硕士论文
[1]水稻新黄绿叶基因YGL9的鉴定和图位克隆[D]. 张天泉.西南大学 2016
[2]拟南芥网格蛋白轻链的功能分析[D]. 王超.浙江师范大学 2012
本文编号：3452079
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