小麦（Triticum aestivum L.）TaNADK1/2的功能及其与TaCaMs的互作关系分析
发布时间：2021-10-23 00:48
钙信号(Ca2+signaling)和NAD信号（NAD signaling）是生物体内两类重要的信号通路,其在细胞信号转导、能量代谢、逆境响应和各种生物学过程中发挥着关键性的作用。钙调蛋白（calmodulin,CaM）和NAD激酶（NAD kinase,NADK）是连接这两个信号网络的重要枢纽蛋白,许多研究表明CaM对NADK具有激活作用,但二者之间的互作关系及其生物学意义仍不明确。本研究采用生物信息学与分子生物学相结合的方法,对小麦TaNADK1和TaNADK2基因的基本功能进行了探索,并初步证明了小麦CaM与NADK之间存在互作关系,取得具体的研究结果如下:1.通过实时定量PCR技术,对小麦TaNADK1和TaNADK2基因进行了表达模式分析。组织表达模式结果表明这两个基因具有明显的组织表达特异性,TaNADK1主要在小麦的穗中表达,而TaNADK2主要在小麦的叶与根中表达;诱导表达模式结果显示,TaNADK1和TaNADK2基因的表达均受到脱落酸（ABA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、生长素（IAA）及甲基紫精（MV）的诱导。此外,通过构建TaNADK1/2...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CaM/CMLs及其靶蛋白在非生物胁迫下对植物细胞Ca2+信号的修饰和解释
西北农林科技大学硕士学位论文约 90 个氨基酸差异之外，均显示出激酶活性。通过功能域分析，他K-2 的 N 末端有 CaMBD，而 SpNADK-1 没有。实验体外显示 SpNAM 依赖性 NADK，可以直接与 CaM 结合并被激活。与 SpNADK-2K-1 和人类的 NADK 虽然没有 CaM 结合位点，但是 N-末端都具有磷酸化前关于肝脏中小鼠 NADK 磷酸化的研究 (Haas and Gygi, 2013)，以M 激活而使 NADK 磷酸化的激酶 CaMKII 的存在，Love 等人得出结论过 Ca2+/CaM 依赖的方式磷酸化 NADK，并证明了这种机制 (Love et a2）。他们通过将 SpNADK-1 和 SpNADK-2 与 HeLa 细胞和[32P] ATP 一了一种有趣的现象，即只有 SpNADK-1 在 Ca2+/CaM 复合物存在时被磷还测定了磷酸敏感位点：SpNADK-1 的第 18 位丝氨酸和人 NADK 的第其中人 NADK 具有与小鼠 NADK 相同的磷酸化位点。该研究发现了 N 末端的磷酸化，不仅揭示了动物中 CaM 对 NADK 调节的分子机制，未发现的复杂 CaM 调控网络提供了一个有意义的实例。
TaNADK2 特异性定量引物（TaNADK1/2-qPCR-F/R）和内参引物（TaGAPDH-qPCR-F/R、TaActin-qPCR-F/R）序列见表 2-1：表 2-1 小麦 TaNADK1 和 TaNADK2 实时定量引物Table 2-1 Wheat TaNADK1 and TaNADK2 primers for qRT-PCR引物名称Primer’s Name引物序列(5’-3’)Primer Sequences扩增长度（bp）amplified lengthTaNADK1-qPCR-F ACTTGACTGCCCTGCCTGAT183TaNADK1-qPCR-R CATAACGAACCGAACCAACACATaNADK2-qPCR-F ACCACCGACTTCCTCCGC160TaNADK2-qPCR-R CAAACAAATCCACGGGCGTaGAPDH-qPCR-F TTAGACTTGCGAAGCCAGCA78TaGAPDH-qPCR-R AAATGCCCTTGAGGTTTCCCTaActin-qPCR-F GAAGTGCTTTTGAAGAGTCGGT207TaActin-qPCR-R TTATTTCATACAGCAGGCAAGC引物合成于上海英俊 Invitrogen 技术服务有限公司。
本文编号：3452142
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CaM/CMLs及其靶蛋白在非生物胁迫下对植物细胞Ca2+信号的修饰和解释
西北农林科技大学硕士学位论文约 90 个氨基酸差异之外，均显示出激酶活性。通过功能域分析，他K-2 的 N 末端有 CaMBD，而 SpNADK-1 没有。实验体外显示 SpNAM 依赖性 NADK，可以直接与 CaM 结合并被激活。与 SpNADK-2K-1 和人类的 NADK 虽然没有 CaM 结合位点，但是 N-末端都具有磷酸化前关于肝脏中小鼠 NADK 磷酸化的研究 (Haas and Gygi, 2013)，以M 激活而使 NADK 磷酸化的激酶 CaMKII 的存在，Love 等人得出结论过 Ca2+/CaM 依赖的方式磷酸化 NADK，并证明了这种机制 (Love et a2）。他们通过将 SpNADK-1 和 SpNADK-2 与 HeLa 细胞和[32P] ATP 一了一种有趣的现象，即只有 SpNADK-1 在 Ca2+/CaM 复合物存在时被磷还测定了磷酸敏感位点：SpNADK-1 的第 18 位丝氨酸和人 NADK 的第其中人 NADK 具有与小鼠 NADK 相同的磷酸化位点。该研究发现了 N 末端的磷酸化，不仅揭示了动物中 CaM 对 NADK 调节的分子机制，未发现的复杂 CaM 调控网络提供了一个有意义的实例。
TaNADK2 特异性定量引物（TaNADK1/2-qPCR-F/R）和内参引物（TaGAPDH-qPCR-F/R、TaActin-qPCR-F/R）序列见表 2-1：表 2-1 小麦 TaNADK1 和 TaNADK2 实时定量引物Table 2-1 Wheat TaNADK1 and TaNADK2 primers for qRT-PCR引物名称Primer’s Name引物序列(5’-3’)Primer Sequences扩增长度（bp）amplified lengthTaNADK1-qPCR-F ACTTGACTGCCCTGCCTGAT183TaNADK1-qPCR-R CATAACGAACCGAACCAACACATaNADK2-qPCR-F ACCACCGACTTCCTCCGC160TaNADK2-qPCR-R CAAACAAATCCACGGGCGTaGAPDH-qPCR-F TTAGACTTGCGAAGCCAGCA78TaGAPDH-qPCR-R AAATGCCCTTGAGGTTTCCCTaActin-qPCR-F GAAGTGCTTTTGAAGAGTCGGT207TaActin-qPCR-R TTATTTCATACAGCAGGCAAGC引物合成于上海英俊 Invitrogen 技术服务有限公司。
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