水稻锌指蛋白基因CRISPR/Cas9突变体的构建及突变分析

发布时间：2021-10-29 22:28

　　【目的】通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻锌指蛋白基因（OsC3H54）进行基因编辑,筛选鉴定出其突变体植株,为深入研究OsC3H54的生物学功能提供良好材料,也为水稻锌指蛋白研究提供参考依据。【方法】通过E-CRISP在Os C3H54基因的外显子上设计靶点序列,将靶点序列连接至OsU6SK载体上,再与Cas9一起连接到pCAMBIA1300双元载体上,获得CRISPR/Cas9重组双元载体,通过农杆菌介导将其转入日本晴水稻愈伤组织,利用潮霉素进行抗性筛选,获得突变体植株,并分析其靶点位置的碱基及编码氨基酸突变情况。【结果】在OsC3H54基因第2个外显子上找到2个符合靶点设计要求的靶点,分别为TG1:5’-CCGCCGCGGCTGCCTTTGGATAC-3’和TG2:5’-CCTTCCC CAATGGCGGGGGTGGC-3’。将OsU6SK载体和靶点序列正确连接的重组载体与Cas9一起连接至pCAMBIA1300双载体上,成功获得CRISPR/Cas9重组双元载体（pCAMBIA1300-Cas9-TG1和pCAMBIA1300-Cas9-TG2）。通过农杆菌介导转入日... 

【文章来源】：南方农业学报. 2020,51(11)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Os C3H54基因结构及基因编辑靶点

锌指蛋白是一个庞大的蛋白家族，不同锌指蛋白行使不同的功能，在植物抗病和非生物胁迫等方面具有重要作用。研究表明，锌指蛋白不仅可与RNA结合发挥作用，还能与其他蛋白质结合发挥功能。拟南芥中锌指蛋白可识别植株体内的RNA并与其结合调控植物的生长发育，其中HUA1是细胞核中的C3H型锌指RNA结合蛋白，在植株生长发育过程中参与调控花的发育（Cheng et al.,2003）。锌指蛋白也可与其他蛋白互作提高植株不同抗性，如棉花锌指蛋白Gh ZFP1可与GZIRD21A和GZIPR5结合，提高转基因烟草的耐盐性和抗真菌性（Guo et al.,2009）。锌指蛋白自身结构也能影响植物的生长发育，如锌指蛋白Ⅶ亚家族中的KH结构蛋白KHZ1和KHZ2能延缓拟南芥叶片衰老，调控植株延迟开花（Yan et al.,2017）。图4 CRISPR/Cas9突变体植株潮霉素抗性基因PCR鉴定结果

CRISPR/Cas9突变体植株潮霉素抗性基因PCR鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3465499