GhWRI1蛋白结构及功能的研究

发布时间：2022-01-02 06:43

　　植物油脂是植物体内三大营养物质之一,也是人类最重要的油脂来源。课题组前期研究了WRINKLED1（WRI1）对陆地棉（Gossypium hirsutum L.）种子油脂含量的影响,结果表明上调转录因子GhWRI1的表达使T0代陆地棉种子油脂含量降低,这与拟南芥WRI1报道的结果相反。为明确转录因子GhWRI1在陆地棉中的转录调控功能,GhWRI1不同结构域对核定位、转录激活及结合顺式作用元件的影响,本研究首先测定了陆地棉GhWRI1转基因T3代植株各组织的油脂及可溶性糖含量;其次,通过GhWRI1蛋白结构域的预测,利用5′端、3′端删除法及点突变法获得了含不同结构域的突变基因;此外,利用无缝克隆的方法构建了一系列表达载体,并通过烟草瞬时表达系统、酵母双杂交系统及双荧光素酶检测系统,分别评估了GhWRI1各个结构域对其功能的影响。主要结果如下:1、GhWRI1能够调控棉花叶片、胚珠及纤维中碳的再分配为鉴定GhWRI1在陆地棉中的功能,本研究利用Quantitative Real-Time PCR筛选了高表达GhWRI1基因的转基因植株,并测定了上调表达GhWRI1 T3代转基因陆地棉叶... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 棉花
    1.2 三酰甘油及其代谢途径
        1.2.1 三酰甘油简介
        1.2.2 三酰甘油的生物合成
        1.2.3 三酰甘油的储存
    1.3 WRI1基因研究现状
        1.3.1 WRINKLED1基因的发现及结构特征
        1.3.2 WRINKLED1的功能研究
    1.4 转录因子
        1.4.1 转录因子简介
        1.4.2 AP2（APETALA2）/EREBP超家族转录因子
第二章 引言
    2.1 立题依据
    2.2 技术路线
第三章 材料与方法
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和载体
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器
        3.1.5 常用试剂配制浓度和主要培养基
    3.2 实验方法
        3.2.1 大肠杆菌转化
        3.2.2 农杆菌感受态细胞制备及农杆菌转化
        3.2.3 酵母菌感受态细胞的制备及酵母转化
        3.2.4 质粒DNA提取
        3.2.5 DNA片段回收
        3.2.6 无缝克隆技术
        3.2.7 酵母双杂交载体构建
        3.2.8 烟草瞬时表达载体构建
        3.2.9 农杆菌介导烟草叶片下表皮细胞瞬时表达
        3.2.10 植物RNA提取
        3.2.11 反转录操作
        3.2.12 基因的表达分析
        3.2.13 植物含油量测定
        3.2.14 植物可溶性糖的提取与测定
        3.2.15 GhWRI1生物信息学分析
        3.2.16 双荧光素酶检测系统
第四章 结果与分析
    4.1 上调GhWRI1的表达影响陆地棉各组织中碳的代谢
        4.1.1 GhWRI1基因在陆地棉中的表达特征
        4.1.2 上调GhWRI1表达的转基因植株的获得
        4.1.3 GhWRI1转基因株系与野生型株系各组织脂质含量比较
        4.1.4 超量表达GhWRI1对陆地棉各组织糖代谢的影响
    4.2 GhWRI1结构域与其功能关系的研究
        4.2.1 GhWRI1结构域及核定位信号生物信息学分析
        4.2.2 影响GhWRI1细胞核定位的结构特点
        4.2.3 影响GhWRI1转录激活的结构域鉴定
        4.2.4 GhWRI1蛋白AP2结构域功能验证
第五章 讨论
    5.1 GhWRI1在陆地棉中的表达可调控陆地棉各组织C流的再分配
    5.2 陆地棉GhWRI1蛋白的转录激活结构域位于C末端，共含有55个氨基酸
    5.3 陆地棉GhWRI1的AP2结构域影响该蛋白的功能
第六章 结论
    6.1 主要结论
    6.2 创新点
参考文献
附录
    附录一 缩略词
    附录二 主要引物序列
    附录三 硕士期间参与课题及科研成果
        一 参与课题
        二 科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]拟南芥转录激活因子AtWRI1研究进展[J]. 杨先友,黄有军,张通,黄春颖.  生物技术通报. 2016(06)
[2]BnWRI1 coordinates fatty acid biosynthesis and photosynthesis pathways during oil accumulation in rapeseed[J]. Xue-Long Wu,Zhi-Hong Liu,Zhang-Hua Hu,Rui-Zhi Huang.  Journal of Integrative Plant Biology. 2014(06)
[3]植物含油量相关转录因子WRINKLED1的研究进展[J]. 黄胜和,丁永红,李东明,陈春香,钟小菊,饶泽昌.  生命科学. 2012(03)
[4]Oil Body Biogenesis during Brassica napus Embryogenesis[J]. Yu-Qing He and Yan Wu (Key Laboratory of Ministry of Education for Plant Developmental Biology, College of Life Science, Wuhan University, Wuhan 430072, China).  Journal of Integrative Plant Biology. 2009(08)
[5]一类植物中特有的转录因子——AP2/EREBP转录因子家族[J]. 谢永丽.  青海师范大学学报(自然科学版). 2006(03)
[6]植物转录因子的结构与调控作用[J]. 刘强,张贵友,陈受宜.  科学通报. 2000(14)
[7]植物转录因子的结构与功能[J]. 陈丽.  植物生理学通讯. 1997(06)

硕士论文
[1]陆地棉纤维次生壁加厚期正向消减文库的构建及差异表达基因分析[D]. 王少干.华中农业大学 2012
[2]新疆棉副产品的主要成分的提取分析研究[D]. 田小红.新疆大学 2012



本文编号：3563682