花生种质资源白藜芦醇检测及高白藜芦醇种质筛选
发布时间：2022-01-04 11:21
花生（Arachis hypogaea L.）,又名“落花生”或“长生果”,是一种营养丰富、食用广泛的油料作物,在我国农业生产中占有重要地位。花生不仅含有大量的脂类、蛋白质和糖类,也含有一些具有保健功能的营养成分,如维生素E、白藜芦醇、可溶性纤维等。白藜芦醇属于天然多酚类化合物,具有显著的抗氧化活性,同时在预防癌症及心血管疾病、增强免疫力等方面有重要作用。花生是除葡萄、虎杖外的少数含白藜芦醇的植物之一,选育高白藜芦醇花生新品种,研究花生白藜芦醇积累及调控机制,是花生育种发展的重要方向。本研究以花生籽仁为对象,在其他作物白藜芦醇检测方法的基础上,优化了花生籽仁白藜芦醇的提取及检测方法,并利用该方法对404份花生种质资源进行了多年多环境的白藜芦醇含量测定,明确了花生资源白藜芦醇含量的变异,发掘出高白藜芦醇的特异种质。主要研究结果如下:1、优化了花生籽仁白藜芦醇提取及检测方法。针对传统方法提取花生籽仁白藜芦醇提取率低、提取时间长、提取物中容易混杂其他物质等问题,研究优化了花生籽仁白藜芦醇提取及检测方法。利用酶解和超声处理相结合的方法提取花生籽仁白藜芦醇,确定最适酶浓度为3 g/L、最佳酶解时...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
白藜芦醇的从头合成途径（周林芳，2019）
中国农业科学院硕士学位论文第二章花生籽仁中白藜芦醇含量检测方法的优化11表2-1正交实验的因素与水平Table2-1Factorsandlevelsoforthogonalexperiment2.2.5统计方法本实验所得的数据采用MicrosoftExcel2010、SpssStatisticsv23等软件处理。差异性显著水平设置p≤0.05。2.3技术路线利用酶解法联合超声萃取法提取花生籽仁中白藜芦醇，主要技术路线如下：首先，通过单因素实验和正交试验优化了提取工艺参数，然后通过稳定性实验、回收率实验、方法对实验等方法对该提取工艺进行验证，最后利用HPLC法测定花生籽仁中白藜芦醇含量（图2-1）。图2-1技术路线图Fig.2-1Thetechnologicalprocessofthisstudy.水平Levels因素FactorsA酶解液浓度AEnzymeconcentration(g/L)B酶解时间BDigestiontime(min)C超声时间CUltrasonictime(min)10302021.5604033906044.512080
中国农业科学院硕士学位论文第二章花生籽仁中白藜芦醇含量检测方法的优化122.4.1标准曲线及标准品、供试品溶液的色谱图采用外标法定量，以甲醇为溶剂，配制成不同浓度梯度（0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4mg/L）的白藜芦醇标准品溶液，测定各个浓度对应的峰面积。所得数据以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到峰面积-浓度标准曲线。从图2-2中可以看出，线性方程为Y=65.186X-5.4539（R2=0.9991），其中X为反式白藜芦醇浓度，Y为不同浓度下的相应峰面积，结果表明该检测方法白藜芦醇浓度和峰面积在一定浓度范围内呈良好的线性关系（图2-2a）。在“2.2.2”的色谱条件下，白藜芦醇标准品的出峰时间为13.8min左右，峰形对称，基线平稳（图2-2b）。供试品溶液中，色谱图中的紫外特征吸收峰与白藜芦醇标准品相同，出峰时间一致，确定为白藜芦醇，且峰形对称，达到基线分离的效果（图2-2c）。图2-2白藜芦醇标准曲线和标准品、供试品色谱图Fig.2-2Standardcurveandthechromatogramsforstandardsolutionandsample注：a表示峰面积与白藜芦醇浓度的标准曲线；字母b和c分别表示白藜芦醇标准品和供试品色谱图。Note:Theletter“a”representsthestandardcurveofpeakareaandresveratrolconcentration;“b”and“c”representthechromatogramsofstandardsolutionandsamplebythemethodoptimizedinthepresentstudy,respectively.2.4.2方法的检出限（LOD）及定量限（LOQ）配制适当浓度的白藜芦醇标准液，以3倍和10倍的信噪比确定方法的检出限（LOD，Limitofdetection）和定量限（LOQ，Limitofquantitation）（FANGetal.,2010）。如图2-3所示，本检测方法的检出限和定量限分别为0.01mg/L和0.09mg/L，换算成样品质量单位分别为0.006μg/g和0.051μg/g。
【参考文献】：
期刊论文
[1]正交试验法优化菊花中总黄酮的提取工艺研究[J]. 陈婷. 工业微生物. 2019(04)
[2]白藜芦醇及衍生物的研究进展[J]. 树林一,赵航,黄雯莉,宋光耀. 河北医药. 2019(13)
[3]白藜芦醇联合二苯乙烯苷通过抗衰老延缓糖尿病肾病进展的研究[J]. 庞婉霞,朱泽兵,侠晨辉,叶霖,刘华锋,刘玉宁,刘伟敬. 中国中西医结合肾病杂志. 2019(05)
[4]白藜芦醇治疗炎症性肠病的研究进展[J]. 陈香,许新微,张朝阳,赵明. 江苏大学学报(医学版). 2019(02)
[5]白藜芦醇在胰岛素抵抗、糖尿病中的研究进展[J]. 赵航,马慧娟,树林一,张运佳,宋光耀. 医学研究杂志. 2019(03)
[6]促进花生生产,保障我国粮油安全[J]. 陈清硕,孙雯,田冕. 农村经济与科技. 2019(01)
[7]HPLC法测定山葡萄藤中白藜芦醇含量[J]. 杨荣艳,刘琬晖,高楠楠. 中国卫生产业. 2018(15)
[8]酶法辅助提取海红果中的白藜芦醇[J]. 樊迎,陈毅,薛霖莉,连文绮,张丹. 山西农业科学. 2018(05)
[9]响应面法优化花生壳中白藜芦醇提取工艺及其抗氧化活性研究[J]. 孙慧,林强,魏微. 应用化工. 2018(05)
[10]花生种子白藜芦醇含量QTL定位分析[J]. 喻博伦,黄莉,邱西克,郭建斌,姜成红,蔡岩,廖伯寿,姜慧芳,陈玉宁,刘念,陈伟刚,吕建伟,宋延滨,罗怀勇. 中国油料作物学报. 2018(01)
博士论文
[1]花生株高和出仁率QTL定位分析[D]. 吕建伟.华中农业大学 2019
[2]酶法提取虎杖中白藜芦醇及白藜芦醇酯的合成研究[D]. 周林芳.江南大学 2019
[3]山葡萄果实转录组分析及白藜芦醇调控机理研究[D]. 殷向静.西北农林科技大学 2016
[4]花生抗黄曲霉菌产毒机制的研究[D]. 王后苗.中国农业科学院 2016
[5]花生品种间耐湿涝性差异及其机理研究[D]. 李林.湖南农业大学 2004
硕士论文
[1]花生荚壳抗黄曲霉菌侵染种质发掘及抗性关联分析[D]. 邱西克.中国农业科学院 2019
[2]白藜芦醇的生物转化途径探索及生物活性研究[D]. 王珊珊.深圳大学 2016
[3]花生白藜芦醇种质的筛选研究[D]. 刘士壮.仲恺农业工程学院 2015
[4]花生种质资源耐渍性鉴定研究[D]. 邱柳.湖南农业大学 2012
[5]白藜芦醇的提取纯化及性能研究[D]. 蔡杨柳.北京化工大学 2010
本文编号：3568243
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
白藜芦醇的从头合成途径（周林芳，2019）
中国农业科学院硕士学位论文第二章花生籽仁中白藜芦醇含量检测方法的优化11表2-1正交实验的因素与水平Table2-1Factorsandlevelsoforthogonalexperiment2.2.5统计方法本实验所得的数据采用MicrosoftExcel2010、SpssStatisticsv23等软件处理。差异性显著水平设置p≤0.05。2.3技术路线利用酶解法联合超声萃取法提取花生籽仁中白藜芦醇，主要技术路线如下：首先，通过单因素实验和正交试验优化了提取工艺参数，然后通过稳定性实验、回收率实验、方法对实验等方法对该提取工艺进行验证，最后利用HPLC法测定花生籽仁中白藜芦醇含量（图2-1）。图2-1技术路线图Fig.2-1Thetechnologicalprocessofthisstudy.水平Levels因素FactorsA酶解液浓度AEnzymeconcentration(g/L)B酶解时间BDigestiontime(min)C超声时间CUltrasonictime(min)10302021.5604033906044.512080
中国农业科学院硕士学位论文第二章花生籽仁中白藜芦醇含量检测方法的优化122.4.1标准曲线及标准品、供试品溶液的色谱图采用外标法定量，以甲醇为溶剂，配制成不同浓度梯度（0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4mg/L）的白藜芦醇标准品溶液，测定各个浓度对应的峰面积。所得数据以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到峰面积-浓度标准曲线。从图2-2中可以看出，线性方程为Y=65.186X-5.4539（R2=0.9991），其中X为反式白藜芦醇浓度，Y为不同浓度下的相应峰面积，结果表明该检测方法白藜芦醇浓度和峰面积在一定浓度范围内呈良好的线性关系（图2-2a）。在“2.2.2”的色谱条件下，白藜芦醇标准品的出峰时间为13.8min左右，峰形对称，基线平稳（图2-2b）。供试品溶液中，色谱图中的紫外特征吸收峰与白藜芦醇标准品相同，出峰时间一致，确定为白藜芦醇，且峰形对称，达到基线分离的效果（图2-2c）。图2-2白藜芦醇标准曲线和标准品、供试品色谱图Fig.2-2Standardcurveandthechromatogramsforstandardsolutionandsample注：a表示峰面积与白藜芦醇浓度的标准曲线；字母b和c分别表示白藜芦醇标准品和供试品色谱图。Note:Theletter“a”representsthestandardcurveofpeakareaandresveratrolconcentration;“b”and“c”representthechromatogramsofstandardsolutionandsamplebythemethodoptimizedinthepresentstudy,respectively.2.4.2方法的检出限（LOD）及定量限（LOQ）配制适当浓度的白藜芦醇标准液，以3倍和10倍的信噪比确定方法的检出限（LOD，Limitofdetection）和定量限（LOQ，Limitofquantitation）（FANGetal.,2010）。如图2-3所示，本检测方法的检出限和定量限分别为0.01mg/L和0.09mg/L，换算成样品质量单位分别为0.006μg/g和0.051μg/g。
【参考文献】：
期刊论文
[1]正交试验法优化菊花中总黄酮的提取工艺研究[J]. 陈婷. 工业微生物. 2019(04)
[2]白藜芦醇及衍生物的研究进展[J]. 树林一,赵航,黄雯莉,宋光耀. 河北医药. 2019(13)
[3]白藜芦醇联合二苯乙烯苷通过抗衰老延缓糖尿病肾病进展的研究[J]. 庞婉霞,朱泽兵,侠晨辉,叶霖,刘华锋,刘玉宁,刘伟敬. 中国中西医结合肾病杂志. 2019(05)
[4]白藜芦醇治疗炎症性肠病的研究进展[J]. 陈香,许新微,张朝阳,赵明. 江苏大学学报(医学版). 2019(02)
[5]白藜芦醇在胰岛素抵抗、糖尿病中的研究进展[J]. 赵航,马慧娟,树林一,张运佳,宋光耀. 医学研究杂志. 2019(03)
[6]促进花生生产,保障我国粮油安全[J]. 陈清硕,孙雯,田冕. 农村经济与科技. 2019(01)
[7]HPLC法测定山葡萄藤中白藜芦醇含量[J]. 杨荣艳,刘琬晖,高楠楠. 中国卫生产业. 2018(15)
[8]酶法辅助提取海红果中的白藜芦醇[J]. 樊迎,陈毅,薛霖莉,连文绮,张丹. 山西农业科学. 2018(05)
[9]响应面法优化花生壳中白藜芦醇提取工艺及其抗氧化活性研究[J]. 孙慧,林强,魏微. 应用化工. 2018(05)
[10]花生种子白藜芦醇含量QTL定位分析[J]. 喻博伦,黄莉,邱西克,郭建斌,姜成红,蔡岩,廖伯寿,姜慧芳,陈玉宁,刘念,陈伟刚,吕建伟,宋延滨,罗怀勇. 中国油料作物学报. 2018(01)
博士论文
[1]花生株高和出仁率QTL定位分析[D]. 吕建伟.华中农业大学 2019
[2]酶法提取虎杖中白藜芦醇及白藜芦醇酯的合成研究[D]. 周林芳.江南大学 2019
[3]山葡萄果实转录组分析及白藜芦醇调控机理研究[D]. 殷向静.西北农林科技大学 2016
[4]花生抗黄曲霉菌产毒机制的研究[D]. 王后苗.中国农业科学院 2016
[5]花生品种间耐湿涝性差异及其机理研究[D]. 李林.湖南农业大学 2004
硕士论文
[1]花生荚壳抗黄曲霉菌侵染种质发掘及抗性关联分析[D]. 邱西克.中国农业科学院 2019
[2]白藜芦醇的生物转化途径探索及生物活性研究[D]. 王珊珊.深圳大学 2016
[3]花生白藜芦醇种质的筛选研究[D]. 刘士壮.仲恺农业工程学院 2015
[4]花生种质资源耐渍性鉴定研究[D]. 邱柳.湖南农业大学 2012
[5]白藜芦醇的提取纯化及性能研究[D]. 蔡杨柳.北京化工大学 2010
本文编号：3568243
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