小麦、百萨偃麦草和花生染色体荧光原位杂交寡核苷酸探针（套）开发与应用

发布时间：2022-02-26 09:36

　　小麦（Triticum aestivum,2n=6x=42,AABBDD）是我国重要的粮食作物。百萨偃麦草（2n=2x=14,JJ）具有很强的耐盐性和抗多种小麦病害,是小麦改良的重要基因资源。染色体工程是小麦改良的有效途径,然而由于传统荧光原位杂交（FISH）所用的质粒探针数目有限,制备程序繁琐、成本高,因此限制了染色体工程效率的提高。寡核苷酸（single strand oligonucleotide,SSON）探针是人工合成的一种带有荧光集团的单链DNA或RNA片段,其长度通常为20～60 nt,具有易设计、合成和修饰,成本低、灵敏度高、重复性好等特点。基于寡核苷酸探针的寡核苷酸FISH技术省去了传统FISH制备探针必需的质粒引进、繁殖、提取、标记或PCR扩增等程序,具有简单、经济和高效的特点,是新一代染色体鉴定技术,具有很大的研究和应用潜力。（1）通过探针长度和浓度效应分析,发现29～59 nt比14～15 nt SSON探针在低浓度下更容易产生清晰稳定的信号,据此建立了利用已知重复序列、小麦染色体3B和百萨偃麦草染色体4JL基因组序列开发重复序列SSON探针的方法:在王艳芝（2... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
    1 染色体分带
    2 荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)
    3 单拷贝基因(序列)FISH
        3.1 gDNA FISH
        3.2 cDNA FISH
    4 寡核苷酸FISH
        4.1 寡核苷酸探针类型与开发方法
        4.2 寡核苷酸探针标记物和标记方法
        4.3 非变性FISH(ND-FISH)
        4.4 影响寡核苷酸FISH因素
        4.5 寡核苷酸FISH的应用
    5. 本研究目的与意义
第二章 小麦和百萨偃麦草寡核苷酸探针(套)开发和应用
    1 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 不同长度寡核苷酸探针FISH和ND-FISH分析
        2.2 利用Afa family重复序列开发小麦新探针
        2.3 小麦3B染色体特异重复序列寡核苷酸探针开发
        2.4 百萨偃麦草基因组特异寡核苷酸探针开发
        2.5 小麦和百萨偃麦草寡核苷酸探针套开发
        2.6 栽培小麦品种染色体多样性分析
        2.7 普通小麦-百萨偃麦草异染色体系分析
        2.8 寡核苷酸探针染液染色体涂染技术
    3 讨论
        3.1 寡核苷酸FISH的优势与局限性
        3.2 百萨偃麦草基因组和小麦染色体3B特异寡核苷酸探针开发
        3.3 小麦和百萨偃麦草寡核苷酸探针套的开发和应用潜力
第三章 花生寡核苷酸探针(套)开发及应用
    1. 材料与方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 结果与分析
        2.1 花生寡核苷酸探针开发及定位
        2.2 花生野生种染色体多样性分析
        2.3 花生染色体结构变异分析
        2.4 A.duranensis染色体序列图与核型对应
    3 讨论
        3.1 利用A.duranensis基因组测序开发花生寡核苷酸探针
        3.2 花生染色体识别
        3.3 花生染色体结构变异
        3.4 不同花生种染色体组关系
        3.5 花生序列图与染色体核型对应
第四章 结论与创新点
    1 结论
    2 创新点
    3 不足之处
参考文献
致谢
攻读学位期间的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]小麦-黑麦1RS/1BL新易位系的创制和分子细胞遗传学鉴定[J]. 王静,王献平,纪军,王志国,安调过,李俊明,张相岐.  作物学报. 2006(01)
[2]利用高灵敏的TSA-FISH在玉米中定位bz1、bz2基因（英文）[J]. 李宗芸,宁顺斌,韩永华,刘立华,宋运淳.  Developmental & Reproductive Biology. 2002(01)
[3]花生属栽培种和野生种间亲缘关系的研究Ⅰ.染色体Giemsa C-显带带型分析[J]. 詹英贤,吴爱忠,程明,周向臣.  北京农业大学学报. 1992(01)
[4]黑麦（Secale cereale）的染色体组型分析[J]. 李国珍.  作物学报. 1982(02)
[5]植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义[J]. 陈瑞阳,宋文芹,李秀兰.  遗传学报. 1982(02)
[6]黑麦染色体的带型及其应用[J]. 陈瑞阳,宋文芹,徐悦凡.  遗传学报. 1979(01)

硕士论文
[1]百萨偃麦草染色体小片段易位的创制、鉴定与基因定位分析[D]. 王艳芝.南京农业大学 2013
[2]百萨偃麦草染色体1J和5J变异体的诱致与鉴定[D]. 谈丽君.南京农业大学 2011
[3]普通小麦—百萨偃麦草异染色体系选育及分子细胞遗传学研究[D]. 沈健.南京农业大学 2011
[4]石蒜属植物染色体分带和荧光原位杂交研究[D]. 王利平.南京林业大学 2007



本文编号：3644387