大豆GmExo70J启动子的克隆及其功能分析

发布时间：2022-04-25 18:02

　　大豆是世界范围内重要的粮食作物和经济作物,其经济和营养价值仅次于禾本科植物,其根系能够与土壤中的根瘤菌共生固氮从而提高土壤肥力。豆科生长在世界上15%的可耕地面积,提供人类大约33%的膳食氮,在发展中国家甚至达到60%。目前,豆科植物作为生物燃料的来源也越来越受到人类的关注。尽管豆科植物如此重要,但我们对它的许多独特性状的了解仍然是非常有限的,比如共生固氮和相关过程的演变。最近,我们在对大豆WRKY家族的分析过程中发现了豆科植物特有的一个EXO70亚类蛋白（GmExo70J）,其部分GmExo70J蛋白通过其N端的跨膜域定位在高尔基体上。此外,一些GmExo70J基因的沉默会导致大豆叶片早衰以及根瘤数量的减少。本实验通过对携带有GmExo70J启动子-GUS载体的转基因拟南芥进行GUS染色,进一步分析了这12个GmExo70J基因的组织表达模式。此外,还检测了部分携带GmExo70J启动子-GUS载体的转基因拟南芥对暗胁迫和热胁迫的响应。然后,对GmExo70J7和GmExo70J8的启动子进行了解析。最后,分析了GmExo70J7和GmExo70J9基因对根瘤菌的响应以及对GmExo... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
摘要
Abstract
缩略词表
1. 引言
    1.1 胞泌复合体的发现及其工作原理
    1.2 植物中EXO70蛋白的研究进展
    1.3 大豆GmExo70J蛋白的发现与研究
2. 材料与方法
    2.1 大豆GmExo70J启动子的克隆及其GUS表达
        2.1.1 GmExo70J启动子-GUS重组载体的构建
        2.1.2 重组载体转化拟南芥
        2.1.3 GmExo70J启动子在拟南芥的GUS表达
        2.1.4 GmExo70J启动子在大豆发根中的GUS表达
    2.2 大豆GmExo70J基因全长的克隆及其在拟南芥中的表达
        2.2.1 GmExo70J基因全长的克隆及其转化拟南芥
        2.2.2 拟南芥种子蛋白的提取
        2.2.3 BCA蛋白质定量确定蛋白浓度
        2.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤
    2.3 GmExo70J对热胁迫和暗胁迫的响应
        2.3.1 热胁迫和暗胁迫处理
        2.3.2 总RNA的提取及cDNA合成
        2.3.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
    2.4 GmExo70J7和GmExo70J8的启动子解析
        2.4.1 GmExo70J7的启动子解析
        2.4.2 GmExo70J8的启动子解析
    2.5 GmExo70J7和GmExo70J9与大豆结瘤的关系
        2.5.1 GmExo70J7和GmExo70J9对根瘤菌侵染的响应
        2.5.2 GmExo70J7和GmExo70J9与大豆结瘤素的关系
3. 结果与分析
    3.1 大豆GmExo70J启动子的克隆及其GUS表达
        3.1.1 GmExo70J基因在幼苗期的转基因拟南芥中的GUS表达
        3.1.2 GmExo70J基因在7周龄的转基因拟南芥中的GUS表达
        3.1.3 GmExo70J基因在开花期转基因拟南芥中的GUS表达
        3.1.4 GmExo70J基因在转基因大豆发根中的GUS表达
    3.2 大豆GmExo70J基因全长的克隆及其在拟南芥中的表达
    3.3 GmExo70J转基因拟南芥对暗胁迫和热胁迫的响应
        3.3.1 GmExo70J对暗胁迫的响应
        3.3.2 GmExo70J对热胁迫的响应
    3.4 GmExo70J7和GmExo70J8的启动子解析
        3.4.1 GmExo70J7的启动子解析
        3.4.2 GmExo70J8的启动子解析
    3.5 GmExo70J7和GmExo70J9与大豆结瘤的关系
        3.5.1 GmExo70J7和GmExo70J9对根瘤菌侵染的响应
        3.5.2 GmExo70J7和GmExo70J9与大豆结瘤素的关系
4. 讨论
    4.1 GmExo70J在拟南芥中的组织特异性表达
    4.2 GmExo70J基因对非生物胁迫的响应
    4.3 GmExo70J蛋白与大豆结瘤的关系
5. 参考文献
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物细胞自噬研究进展[J]. 王燕,刘玉乐.  中国细胞生物学学报. 2010(05)

博士论文
[1]活性氧、激素互作、自噬和转录因子在番茄和拟南芥逆境胁迫响应中的作用机理和调控[D]. 周杰.浙江大学 2014

硕士论文
[1]大豆胞囊线虫诱导相关启动子的筛选及大豆GmWRP1和GmExo70J蛋白功能鉴定[D]. 王泽.浙江大学 2016



本文编号：3648075