大豆皂苷合成代谢机制的研究

发布时间：2022-07-22 18:20

　　大豆（Glycine max）是中国重要的农作物之一,大豆皂苷是其重要的次生代谢产物之一。随着对大豆皂苷研究的不断深入,发现皂苷有诸多对人体有益的功能,因此越来越受到人们的重视。但对大豆皂苷合成代谢机制研究较少。本实验以山西72份大豆种质资源为材料,采用高效液相色谱法（High performance liquid chromatography,HPLC）对72份大豆材料种子中大豆皂醇含量进行了测定,分析了不同材料中大豆皂醇组成和含量的差异,评价了不同粒重、种皮颜色和生态类型大豆材料中大豆皂醇含量的差异性。选取大豆皂苷含量不同的大豆材料采用高效液相-电喷雾离子化串联质谱联用技术（High performance liquid-electrospray ionization tandem mass spectrometry technology,HPLC-ESI-MS/MS）对籽粒发育过程中大豆皂苷的积累规律进行了研究,并进行转录组测序,筛选出参与大豆皂苷代谢的差异表达基因。利用qRT-PCR技术分析了大豆籽粒发育过程中以及不同组织中差异表达基因表达模式。本实验从转录组和代谢组水平上探究... 

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
第一章 前言
    1.1 引言
    1.2 大豆皂苷简介
        1.2.1 大豆皂苷组成与分类
        1.2.2 大豆皂苷的分布特征
        1.2.3 大豆皂苷的合成代谢途径
        1.2.4 大豆皂苷的检测方法
    1.3 转录组测序技术研究进展
    1.4 本研究的目的和意义
    1.5 技术路线
第二章 不同材料大豆皂醇含量分析
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 大豆皂苷的提取
        2.2.2 大豆皂苷的水解
        2.2.3 大豆皂醇的检测
        2.2.4 标准工作曲线
        2.2.5 数据分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 HPLC法分析大豆皂醇含量
        2.3.2 不同粒重类型大豆皂醇含量分析
        2.3.3 不同种皮颜色大豆材料皂醇含量分析
        2.3.4 野生、半野生、栽培大豆材料皂醇含量分析
        2.3.5 大豆皂醇含量与籽粒性状的相关分析
        2.3.6 不同组织中大豆皂醇含量分析
    2.4 小结与讨论
第三章 转录组测序鉴定大豆皂苷代谢关键酶基因
    3.1 材料与试剂
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 取材
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 主要试剂
    3.2 实验方法
        3.2.1 大豆皂苷的提取
        3.2.2 大豆皂苷的测定
        3.2.3 转录组测序
    3.3 结果与分析
        3.3.1 HPLC-ESI-MS/MS分析不同时期大豆籽粒皂苷含量
        3.3.2 转录组数据分析
    3.4 小结与讨论
第四章 大豆GmHMGR1基因的克隆及表达分析
    4.1 材料与试剂
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 RNA提取
        4.2.3 DNA提取
        4.2.4 cDNA的合成
        4.2.5 PCR反应体系
        4.2.6 qRT-PCR反应
        4.2.7 测序
        4.2.8 基因序列生物信息学分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 DNA与RNA质量检测
        4.3.2 GmHMGR1基因的克隆
        4.3.3 GmHMGR1 DNA及cDNA序列分析
        4.3.4 GmHMGR1蛋白质结构分析
        4.3.5 GmHMGR1蛋白质同源性分析
        4.3.6 GmHMGR1基因系统进化分析
        4.3.7 GmHMGR1基因表达分析
        4.3.8 βAS基因表达分析
        4.3.9 UGT73B5基因表达分析
    4.4 小结与讨论
第五章 全文总结
参考文献
Abstract
攻读硕士学位期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]不同大豆品种大豆皂苷组成分析[J]. 岳爱琴,王卫东,徐海军,王敏,郭春绒,赵晋忠,杜维俊.  中国粮油学报. 2017(05)
[2]绞股蓝法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及其序列分析[J]. 蒋东,唐银琳,陶晨陈,吴耀生.  生物技术通讯. 2014(02)
[3]甘草HMGR基因cDNA的克隆及功能鉴定（英文）[J]. 刘颖,许巧仙,席培宇,陈宏昊,刘春生.  药学学报. 2013(05)
[4]人参皂苷合成生物学关键元件HMGR基因克隆与表达分析[J]. 罗红梅,宋经元,李雪莹,孙超,李春芳,骆翔,李滢,陈士林.  药学学报. 2013(02)
[5]大豆皂甙对人肝癌细胞QGY-7703的生长抑制作用研究[J]. 黄进,张民,李忠,牛雯,张声华.  营养学报. 2004(06)

硕士论文
[1]人参βAS基因的表达调控与功能分析[D]. 曹豪杰.吉林大学 2013
[2]一个中国南方野生大豆基因组深度测序及其分析[D]. 李泽锋.浙江大学 2012



本文编号：3665102