黄花苜蓿MfCML24基因的功能研究

发布时间：2022-08-08 17:41

　　黄花苜蓿（Medicago falcata L.）是一种非常抗旱、抗寒、耐盐碱、耐贫瘠的豆科牧草,是高寒地区人工牧草种植和天然草地改良的理想牧草,是苜蓿抗性育种不可或缺的种质资源。因此,从中挖掘抗寒基因,揭示抗寒机制具有重要意义。本研究以黄花苜蓿和抗寒性较差的柱花草（Stylosanthes guianensis）为材料,参照黄花苜蓿和截型苜蓿低温响应基因表达谱,从黄花苜蓿中克隆了一个响应低温显著上调表达的未知功能基因MfCML24,获得过表达MfCML24的转基因柱花草,分析它们的表型及抗冷性,初步探讨该基因的功能。主要研究结果如下:采用定量RT-PCR方法,分析了MfCML24的时空表达特征,结果表明MfCML24在叶片当中的表达量最高,其次为叶柄,在茎和根中的表达量最低,大约只有叶片表达量的1/5左右。分析了黄花苜蓿和截型苜蓿叶片中CML24基因响应低温的动态变化,结果显示,低温处理1 h后MfCML24开始受到诱导,4h达到最大,而MtCML24基因不受低温诱导。对MfCML24、MtCML24基因的启动子序列的顺式作用元件进行比对,发现MfCML24启动子序列中除包含基本的启... 

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词
1 前言
    1.1 植物抗寒性研究进展
    1.2 黄花苜蓿抗寒性研究进展
    1.3 柱花草抗冷性研究进展
    1.4 CML基因功能研究进展
    1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 PCR引物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 培养基配方
    2.2 材料培养与处理
        2.2.1 材料培养
        2.2.2 材料处理
    2.3 实验方法
        2.3.1 MfCML24基因的克隆与序列分析
        2.3.2 MfCML24基因表达分析
        2.3.3 MfCML24表达载体的构建
        2.3.4 MfCML24基因的亚细胞定位
        2.3.5 MfCML24启动子分析
        2.3.6 农杆菌介导转化柱花草
        2.3.7 转基因柱花草的分子鉴定
        2.3.8 Basta抗性筛选
        2.3.9 叶绿素荧光的测定
        2.3.10 相对电导率的测定
3 结果与分析
    3.1 MfCML24及其启动子克隆与序列分析
    3.2 亚细胞定位
    3.3 MfCML24基因的表达分析
    3.4 过表达MfCML24转基因柱花草的获得与分子检测
    3.5 转基因柱花草的Basta抗性
    3.6 转基因柱花草的抗冷性鉴定
4 讨论与结论
    4.1 MfCML24亚细胞定位
    4.2 MfCML24的时空表达特征
    4.3 MfCML24表达与植物抗寒性的关系
    4.4 结论
致谢
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]植物低温胁迫响应机理的研究进展[J]. 薛爽,饶丽莎,左丹丹,汪凤林,林思祖.  安徽农业科学. 2016(33)
[2]小麦抗寒机制的研究进展[J]. 张敏,蔡瑞国,贾秀领,王文颇,王岩岩.  东北农业科学. 2016(04)
[3]巴西橡胶树类钙调素蛋白基因HbCML27克隆与表达分析[J]. 刘辉,邓治,陈江淑,李德军.  分子植物育种. 2015(12)
[4]黄花苜蓿抗逆性研究进展[J]. 武祎,田雨.  吉林畜牧兽医. 2015(12)
[5]应用电导率法及Logistic方程测定6种观赏海棠的抗寒性[J]. 韩玲玲,韩志强,杨强胜,吐娜木拉,李娟娟.  现代农业科技. 2015(12)
[6]应用电导率法及Logistic方程测定油橄榄品种的抗寒性[J]. 令凡,李朝周,回振龙,焦健,吕鹏.  广东农业科学. 2015(01)
[7]COR基因在植物抗寒基因工程中的作用[J]. 黄永会,刘永翔,朱英,刘作易.  贵州农业科学. 2014(12)
[8]9个秋菊品种叶片脂肪酸组成及其抗寒性评价[J]. 王翠丽,李永,崔洋,李永华.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(11)
[9]低温胁迫下植物生理反应机理研究进展[J]. 任军,黄志霖,曾立雄,施征.  世界林业研究. 2013(06)
[10]电导法配合Logistic方程测定5种高架绿化植物的抗寒性[J]. 张鹏翀,王挺,刘锦,黎念林,余金良.  广东农业科学. 2013(19)

博士论文
[1]甘蓝花粉管钙感受蛋白编码基因CML49的克隆及功能鉴定研究[D]. 许俊强.西南大学 2014



本文编号：3671947