荧光素酶作为可视标记整株检测转基因玉米

发布时间：2022-11-03 20:31

　　利用活体成像系统检测转基因玉米中荧光素酶信号整株实时筛选高表达的转基因玉米。结果表明,按照信噪比大于2为高表达转基因阳性植株的标准,获得的T₁代66株转pMD35LUC的植株中,11株有荧光信号,其中2株信噪比值大于2;获得的T₁代68株转化pMDUBLUC的植株中,30株有荧光信号,6株信噪比值大于2。信噪比值大于2的植株移栽成活7株,经PCR检测均为阳性。2株T₁植株的T₂代植株无荧光信号值;5株T₁植株的T₂代植株都有数量不等的植株有荧光信号,其中4株T₁株都有信噪比值大于2的T₂代植株,经PCR检测均为阳性。本研究跳过一系列大量的操作复杂、耗时、高成本的体外分子检测,直观、准确、实时、低成本地淘汰大量非转基因和表达不强的植株或株系,为玉米转基因植株的筛选提供了有效方法。 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 载体构建
    1.2 转化玉米
    1.3 T1代阳性植株的检测
        1.3.1 活体成像系统检测信号按信噪比确定候选转基因植株
        1.3.2 PCR检测进一步证实
    1.4 T2代阳性植株的检测
        1.4.1 活体成像系统检测信号按信噪比确定候选转基因植株
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 试验材料
    3.2 载体构建
        3.2.1 构建pMD18T-Nos
        3.2.2 构建pMD18T-Luc-Nos
        3.2.3 构建pMD18T-35S-Luc-Nos
        3.2.4 构建pMD18T-Ub-Lus-Nos
    3.3 转化玉米
    3.4 活体成像系统下检测受检植株的荧光信号
    3.5 候选转基因植株的PCR检测


【参考文献】：
期刊论文
[1]GUS报告系统在植物基因功能研究中的应用和优化[J]. 杨丹丹,王俊杰,梁卫红.  中国生物化学与分子生物学报. 2014(08)
[2]植物转基因技术研究进展[J]. 骆翔,刘志颐,章树民,申硕,王德福,王劲松.  中国农学通报. 2014(15)
[3]花粉介导法将TaPHR1∷GFP融合蛋白基因导入玉米[J]. 王秀红,白建荣,孙毅,刘惠民,史向远,任志强.  西北植物学报. 2011(09)
[4]中国作物分子设计育种[J]. 王建康,李慧慧,张学才,尹长斌,黎裕,马有志,李新海,邱丽娟,万建民.  作物学报. 2011(02)
[5]两种根癌土壤杆菌介导的荧光素酶在植物体内表达分析[J]. 薛杨,赵文军,孙现超,青玲,杨水英.  西南大学学报(自然科学版). 2010(12)
[6]转基因植物的检测策略和检测技术[J]. 张莹,张永军,吴孔明,赵奎军,彭于发,郭予元.  植物保护. 2007(01)
[7]植物功能基因组研究方法及进展[J]. 高泽发,陈绪清,杨凤萍,梁荣奇,张立全,张晓东.  生物学杂志. 2005(06)
[8]抗除草剂基因和荧光素酶基因在小麦愈伤组织中的稳定表达[J]. 杨书礼,曾君祉,吴有强,朱小平,王东江,张健.  Journal of Integrative Plant Biology. 1993(11)



本文编号：3700578