NO和H 2 O 2 介导薏苡仁油诱导灵芝三萜合成的信号转导机制

发布时间：2022-11-10 21:38

　　灵芝是具有广阔应用前景的药用原材料,其关键活性成分三萜化合物具有重要药理作用。但灵芝细胞中三萜含量和产量均较低,限制了其规模化应用。本论文采用液体深层发酵（细胞培养）技术,研究了外源诱导子薏苡仁油对灵芝深层发酵过程中三萜合成的影响,发现适宜浓度的薏苡仁油可显著提高灵芝三萜的合成量和产量;进一步从信号转导的角度分析了薏苡仁油诱导灵芝三萜合成的基本作用机制。主要研究内容和结果如下:1.诱导子（薏苡仁油）在1.5g/L浓度下,可显著促进灵芝菌丝体生长和灵芝三萜的合成量,且诱导子在菌丝体细胞指数生长末期到稳定期早期加入表现最为敏感,这种作用可在较长时间内诱导灵芝菌丝体细胞产次级代谢产物。2.添加薏苡仁油可有效诱导灵芝细胞中NO浓度、PAL活性和CYP450含.量的增加,且NO可以作为PAL活化和CYP450产生的上游信号分子起作用,它是薏苡仁油诱导灵芝菌丝体细胞中PAL活化和CYP450产生信号转导、灵芝三萜合成积累途径中必定产生、但不是唯一的信号分子。3.H2O2位于PAL活化和CYP450产生的上游,薏苡仁油诱导灵芝三萜合成通过H2O2所介导的信号转导途径,但H2O2途径并不是薏苡仁油诱导... 

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 研究背景
    1.1 微生物深层发酵生产次生代谢产物的研究现状
    1.2 微生物细胞次生代谢产物合成调控研究现状
        1.2.1 营养物质对代谢产物的影响
        1.2.2 前体物质的添加对次生代谢的影响
        1.2.3 环境因素对次生代谢的影响
        1.2.4 诱导子对次生代谢的影响
    1.3 NO和H_2O_2对微生物细胞次生代谢产物合成的作用
        1.3.1 NO和H_2O_2产生的途径及生理功能
        1.3.2 NO和H_2O_2的信号转导机制及相互作用
    1.4 灵芝三萜的结构、种类、代谢物产生途径、诱导子的调节及其药理作用
        1.4.1 灵芝三萜的结构及种类
        1.4.2 灵芝三萜的代谢物产生途径
        1.4.3 灵芝三萜合成的诱导调节
        1.4.4 灵芝三萜的生理作用
    1.5 论文选题目的和意义
2 薏苡仁油诱导灵芝菌丝体合成灵芝三萜
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验试剂
        2.2.3 实验仪器
        2.2.4 实验方法
    2.3 结果与分析
        2.3.1 熊果酸标准曲线制作
        2.3.2 灵芝菌丝体细胞生长曲线
        2.3.3 薏苡仁油对灵芝菌丝体细胞生长的影响
        2.3.4 薏苡仁油对灵芝三萜含量的影响
    2.4 结论与讨论
3 NO介导薏苡仁油诱导灵芝三萜合成的信号转导
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验试剂
        3.2.3 实验仪器
        3.2.4 诱导及处理方法
    3.3 结果与分析
        3.3.1 NaNO_2标准曲线
        3.3.2 牛血清蛋白标准曲线
        3.3.3 薏苡仁油诱导细胞中NO释放、PAL活化及CYP450产生
        3.3.4 NO是薏苡仁油诱发PAL活化及CYP450产生的上游信号
        3.3.5 SNP对PAL活性和CYP450含量的影响
        3.3.6 cPITO和L-NNA对薏苡仁油诱导细胞合成灵芝三萜的影响
    3.4 结论与讨论
4 H_2O_2介导薏苡仁油诱导灵芝三萜合成的信号转导
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 实验试剂
        4.2.3 实验仪器
        4.2.4 诱导及处理方法
    4.3 结果与分析
        4.3.1 过氧化氢标准曲线绘制
        4.3.2 薏苡仁油诱发细胞中H_2O_2释放、PAL活化和CYP450产生
        4.3.3 H_2O_2对PAL活化和CYP450产生的作用
        4.3.4 薏苡仁油诱导下PAL活性和CYP450含量对H_2O_2浓度的依赖性
    4.4 结论与讨论
5 NO和H_2O_2在薏苡仁油诱导灵芝三萜生物合成过程中的相互作用
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 实验试剂
        5.2.3 实验仪器
        5.2.4 诱导及处理方法:
    5.3 结果与分析
        5.3.1 H_2O_2在介导薏苡仁油诱导灵芝三萜合成过程对NO的依赖性
        5.3.2 NO在介导薏苡仁油诱导灵芝三萜合成过程对H_2O_2的依赖性
        5.3.3 H_2O_2与NO通过独立途径介导薏苡仁油诱导灵芝三萜的生物合成
    5.4 结论和讨论
6 主要结论
参考文献
附录 攻读学位期间的主要学术成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及次生代谢产物合成的影响[J]. 夏伟,熊玉萍,朱畇昊,董诚明,任龙飞,杜真辉.  中国实验方剂学杂志. 2017(03)
[2]非生物诱导子茉莉酸甲酯和水杨酸对半夏悬浮细胞中生物碱代谢的影响[J]. 段永波,鲁放,崔婷婷,赵丰兰,滕井通,盛玮,张爱民,薛建平.  中国中医药信息杂志. 2017(01)
[3]灵芝酸A对人前列腺癌细胞DU-145细胞凋亡的影响[J]. 潘恩山,李煜罡.  广东医学. 2017(01)
[4]鹿特异性复合麻醉剂对大鼠脑区NOS活性及NO/cGMP信号转导系统的影响[J]. 尹柏双,宋永利,付连军,呼显生,沙万里,方文山,高利.  中国兽医杂志. 2016(09)
[5]基于油酸诱导的高产三萜灵芝菌丝体发酵条件优化[J]. 孙冰沁,秦可欣,王桂荣,何国庆.  食品工业科技. 2016(24)
[6]筛选调控植物黄芪皂苷含量诱导子的研究[J]. 常越,闫嵩,刘振鹏,任伟超,马伟,刘玠.  中华中医药杂志. 2016(08)
[7]4种中草药提取物对灵芝液态发酵三萜产物形成的影响[J]. 赵小瑞,贠建民,艾对元,张紊玮,赵风琴,李宏珍,贾亚莉.  食品与发酵工业. 2016(03)
[8]一氧化氮对干旱胁迫下白菜幼苗微管蛋白的影响[J]. 马晓丽,冀瑞萍.  生物技术通报. 2016(02)
[9]CGRP通过NOS/NO通路抑制低氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡[J]. 段莉肖,雷寒,张羿,万彪,冯清平,黄玮.  基础医学与临床. 2016(01)
[10]灵芝薏苡仁方治疗恶性肿瘤临床观察[J]. 李灿.  四川中医. 2015(12)

博士论文
[1]灵芝三萜和金银花绿原酸生物合成途径关键酶基因的挖掘及分析[D]. 徐晓兰.北京协和医学院 2013
[2]灵芝基因沉默体系的建立及NADPH氧化酶基因家族功能分析[D]. 穆大帅.南京农业大学 2013

硕士论文
[1]灵芝中功能性β-葡聚糖的提取研究[D]. 曹静.中南林业科技大学 2015
[2]H2O2和NO参与水杨酸诱导丹参培养细胞中丹酚酸B生物合成的信号转导[D]. 陈红艳.西北农林科技大学 2012
[3]深海细菌Shewanella piezotolerans WP3极端环境适应性机理的研究——脂肪酸系统与深海噬菌体SW1在环境适应中的作用和调控[D]. 王峰.厦门大学 2008



本文编号：3705332